182902. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vérnyomáscsökkentő hatású dipeptid származékok előállítására
1 182 902 2 oszlopból 10%-os ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk. A D20-ban felvett NMR spektrumban 7,2 delta-értéknél szingulett (5H), széles triplett 3,0 delta-érték központtal (6H), széles multiplett 1,3 delta-értéknél (6H) és széles dublett 0,9 delta-értéknél (6H) észlelhető. 45. példa A. N- ( 1 -Karboxi-3-fenil-propil)- L-lizil-L-prolinhidrokloridsó A 42. példában ismertetett módon 2-oxo-4-fenil-vajsavat és e-terc-butoxikarbonil-L-lizil-L-prolint nátriumciano-bór-hidrid jelenlétében kondenzálunk. Az e-tercbutoxikarbonil védőcsoport csaknem teljes mértékben lehasad akkor, amikor a terméket az erősen savas ioncserélő gyantával adszorbeáltatjuk. A nyers N-(l-karboxi-3-fenil-propil)-L-lizil-L-prolint a gyantáról 10%-os ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk, majd fagyasztva szárítjuk és LH-20 gélen végzett gélszűréses kromatografálással tisztítjuk. Az NMR spektrumból a terc-butoxikarbonil-csoport protonjainak megfelelő csúcs eltűnik, ha a terméket 4 n etil-acetátos hidrogén-klorid-oldattal kezeljük. Az ekkor kapott cím szerinti hidrokloridsó NMR spektruma a várt szerkezettel összhangban van. A tömegspektrumban 693 m/e egységnél a tetraszililezett származéknak megfelelő molekulaion észlelhető. XAD-2 gyantán végzett kromatografáláskor, eluálószerként 3,5 % acetonitrilt használva 0,1 mólos ammónium-hidroxidoldatban N-alfa-[l-(S)-karboxi-3-fenil-propil]-L-lizil-L- prolin állítható elő. B. N-alfa-[ 1 -(S)-karboxi-3-fenil-propil] -L-lizil- L-prolin A 42. példában ismertetett módon 2-oxo-4-fenil-vajsavat és N-e-terc-butoxikarbonil-L-lizil-L-prolint kondenzálunk nátrium-ciano-bór-hidrid jelenlétében. A kondenzációs terméket erősen savas ioncserélő gyantával adszorbeáltatjuk, majd a gyantát 2 térfogat % piridint tartalmazó vízzel eluáljuk. A termékben gazdag frakciókat bepároljuk üveges csapadékot kapva, amelyet azután a terc-butoxikarbonil védőcsoport eltávolítása céljából 4 n etil-acetátos hidrogén-klorid-oldattal kezelünk. A kapott hidrokloridsót a megfelelő szabad bázissá alakítjuk erősen savas ioncserélő gyantán végzett adszorbeáltatás, majd a gyanta 2 térfogat % piridint tartalmazó vízzel való eluálása útján. A termékben gazdag frakciók fagyasztásos szárításakor pelyhes fehér csapadékként N-alfa-(l-karboxi-3-fenil-propil)-L-lizil-L-prolint kapunk. NMR spektruma megfelel a várt szerkezetnek. Tömegspektrumában 549 m/e egységnél a diszililezett származéknak megfelelő molekulaion észlelhető. Ebből a diasztereoizomer-keverékből kromatografálással a cím szerinti izomer különíthető el. 46. példa N- ( 1 -Karboxi-3-fenil-propil) -L-3-fluor-alanil-L-prolin 420 mg L-3-fluor-alanin aceton és víz 1:1 térfogatarányú elegyéből 4 ml-rel készült oldatához 590 mg trietil-amint és 1,06 g 2-terc-butoxikarboniloxiimino- 2-fenil-acetonitrilt adunk. Az így kapott reakcióelegyet 2,5 órán át keverjük, majd hideg 5%-os vizes káliumhidrogén-karbonát-oldatot adunk hozzá és etil-acetáttal extraháljuk. A vizes fázist ezután hideg 1 n sósavoldattal 12 megsavanyítjuk, majd etil-acetáttal extraháljuk. Az utóbbi extraktumot telített vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítjuk és szárazra pároljuk, 800 mg mennyiségben 91—93 °C olvadáspontú L-terc-butoxikarbonil-3-fluor-alanint kapva. Az utóbbi vegyületből 800 mg és 1,5 g prolin-benzilészter 8 ml metilén-kloriddal készült oldatához 0°C-on keverés közben 845 mg diciklohexil-karbodiimid 6 ml metilén-kloriddal készült oldatát adjuk, majd az így kapott reakcióelegyet 0°C-on 2 órán át, 20°C-on pedig 18 órán át állni hagyjuk. Ezt követően a reakcióelegyet szűrjük, a kiszűrt csapadékot pedig metilén-kloriddal mossuk. A szűrletet a mosófolyadékkal egyesítjük, majd az így kapott elegyet hideg 1 n sósavoldattal, hideg 5 %-os kálium-hidrogén-karbonát-oldattal és végül telített vizes nátrium-klorid-oldattal extraháljuk, vízmentes nátriumszulfát fölött szárítjuk és szárazra pároljuk. A maradékot Silica gel H jelzésű anyagból álló oszlopra felvisszük, majd 6 térfogat % acetont tartalmazó kloroformmal eluálást végzünk, a tiszta védett dipeptidet kapva. A terc-butoxikarbonil védőcsoportot ezután eltávolítjuk úgy, hogy a védett dipeptidet 8 ml 4 n etil-acetátos hidrogén-klorid-oldattal összekeverve 0°C-on egy órán át állni hagyjuk, majd a keverékhez közel 20 ml dietilétert adunk. Ekkor 450 mg mennyiségben 158-161 °C olvadáspontú L-3-fluor-alanil-L-prolin-benzilészter-hidroklorid csapódik ki. A csapadékot szűréssel elkülönítjük, majd 6 ml víz és 2 ml etanol elegyében oldjuk. A kapott oldathoz 60 mg 10% fémtartalmú szénhordozós palládiumkatalizátort adunk, majd 1 at nyomáson és 20°C-on 90 percen át hidrogénezünk. Szűrés és a szűrlet szárazra párlása után 330 mg mennyiségben L-3-fluor-alanil-L- prolin-hidrokloridot kapunk. Tömegspektrumában 348 m/e egységnél a ditrimetilszililezett származéknak megfelelő molekulaion észlelhető. 375 mg 4-fenil-2-oxo-vajsav és 100 mg L-3-fluoralanil- L-prolin-hidroklorid 3 ml vízzel készült és nátriumhidroxiddal 7 pH-ra beállított oldatához 80 mg nátriumciano-bór-hidridet adunk, majd az így kapott reakcióelegyet 20 órán át keverjük és ezután a 24. példában ismertetett módon feldolgozzuk. Az LH-20 jelzésű gélen végzett szűrés útján tisztított termék tömegspektrumában 510 m/e egységnél a ditrimetilszililezett származéknak megfelelő molekulaion észlelhető. Szilikagélen etilacetát, ecetsav, n-butanol és víz 1:1:1:1 térfogatarányú elegyével mint futtatószerrel végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatkor 0,7 Rf-értékkel egyetlen foltot ad. A diasztereoizomerek a 22. példában ismertetett módon XAD-2 gyantán különíthetők el. 47. példa N-(l-Etoxikarbonil-3-fenil-propil)-L-alanil-L-3,4-dehidroprolin A 28. példában ismertetett módon előállítható L-alaniI-L-3,4-dehidroprolin a 23. példában ismertetett módon a cím szerinti vegyületté alakítható. A kapott két komponensű diasztereomer keverék szilikagél lemezen N- butanol, víz és ecetsav 4:1:1 térfogatarányú elegyével mint futtatószerrel végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatkor 0,82 és 0,79 Rf értékekkel egy nagyobb, illetve egy kisebb foltot ad. Tömegspektrumában 518 m/e egységnél a ditrimetilszililezett származéknak megfelelő molekulaion észlelhető. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
