182866. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új tetrapeptid-származékok előállítására
1 Î82 866 2 majd 40 ml tetrahidrofuránban oldott 19,4 ml {0,24 mól) etiljodidot 20 perc alatt cseppenként hozzáadunk. Ezután a keveréket 0 °C-on 4 órán át állni hagyjuk. A keverékhez még 19,4 ml (0,24 mól) etiljodidot adunk két egyenlő részletben. A keveréket 2 órán át 0°C-on keverjük, majd 10 ml jégecetet adunk hozzá. 10 perc keverés után a keveréket 400 ml összetört jégbe öntjük. Az így nyert vizes fázis pH-ját 2n nátriumhidroxidoldattal 8,0-ra beállítjuk, éterrel kétszer extraháljuk, és ezután a rizes keveréket hideg 2n sósav hozzáadásával megsavanyítjuk úgy, hogy a pH 2,5 legyen. A vizes keveréket ezt követően etilacetáttal extraháljuk, az extraktumot vízzel mossuk, vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk, majd vákuumban az oldószert elpárologtatjuk. A visszamaradó szirupot 200 ml éterben feloldjuk, és 8 ml (0,04 mól) DCHA-t adunk hozzá. A keletkezett csapadékot kiszűrjük, és a szűrletet l,5n citromsavoldattal és vízzel extraháljuk. Az éteres fázist vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk, vákuumban az oldószert elpárologtatjuk, és ily módon 4,6 g (az elméleti érték 39 %-a) kívánt terméket kapunk. O NMR ő (fenil) = 7,2; ô(Me3C()l -) = 1,4. B. N“-terc-butiloxikarbonil-(Na-etil)-L-fenilalanilamid 60 ml N,N-dimetilformamidban (DMF) 4,3 g (0,0146 mól) az A részben leírtak szerint előállított N“-tercbutiloxikarbonil-Na-etil-L-fenilalanint feloldunk. A keveréket 0 °C-ra lehűtjük, és 3,0 g (0,0146 mól) N,N-diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá. A reakciókeveréket 2 órán át 0 °C hőmérsékleten, majd 72 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A keveréket ezután 0 °C- ra lehűtjük, ezután szűrjük, a szűrletet vákuumban bekoncentráljuk, és a visszamaradó olajat etilacetátban feloldjuk. Az oldatot In nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, azután vízzel, hideg 1,5 n citromsav-oldattal és újból vízzel extraháljuk. A szerves fázist vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk, majd bekoncentráljuk, és ily módon 3,93 g (az elméleti érték 91 %-a) kívánt terméket nyerünk. [ajjj = -101,51° (c = 1, MeOH). A C16H„Nj 03 képlet alapján (Ms = 292,4) az analízis számított értékei: C 65,73, H 8,27, N 9,58 %, talált értékei: C 66,03, H 8,13, N 9,85 %. C. (N“-etil)-L-fenilalanilamid-hidrokloridsó 3,5 g (11,95 mmól) B részben leírtak szerint előállított Na-terc-butiloxikarbonil-(N°'-etil)-L-fenilalanilamidot feloldunk 40 ml frissen előállított jégecetben, mely vízmentes hidrogénkloridot (In), 1,5 ml anizolt és 1,5 ml (C2H5)SiH-et tartalmaz. Az így nyert keveréket szobahőmérsékleten 30 percig keverjük. A keveréket ezután éterbe öntjük, a keletkezett csapadékot egyesítjük, szárítjuk, és ily módon 2,6 g (az elméleti 96 %-a) kívánt terméket kapunk, melynek olvadáspontja 276- 277 °C. A CnH16N2OCl képlet alapján (Ms =227,7) az analízis számított értékei: C 58.02. H 7.08. N 12.30%. talált értékei: C 57,97, H 7,26, N 12,54 %. D. N“-terc-butiloxikarbonil-L-tirozil-L-alaniI-glicil(N"-etil)-L-fenilalanilamid 50 ml DMF-hoz 1,14 g (0,005 mól) C rész szerint előállított (N“-etil)-L-fenilalanilamid-hidrokloridsót adunk. A keveréket 0°C-ra lehűtjük, majd 2,95 g (0,005 mól) N<* - tere - butiloxikarbonil - L - tirozil - D - alanil - glicin- DCHA-sót adunk hozzá, és 0 °C-on 5 percig keverjük. A keverékhez ezután 675 mg (0,005 mól) HBT-t és 1,03 g (0,005 mól) DCC-et adunk, majd 0 °C hőmérsékleten 6,5 órán át és ezután szobahőmérsékleten 20 órán át keverjük. Ezt a keveréket 0 °C-ra lehűtjük és szűrjük. A szűrletet vákuumban bekoncentráljuk, a visszamaradó olajat etilacetátban feloldjuk, és In nátriumhidrogénkarbonát-oldattal. vízzel, hideg l,5n citromsav-oldattal és újból vízzel extraháljuk. A szerves fázist vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk, és vákuumban bekoncentráljuk. Az így nyert olajat egy 40 cmX3 cm nagyságú Grace és Davison Grade 62 szilikagél oszlopon, kloroformban abszorbeáljuk. A terméket egy lépésenként csökkenő mennyiségű kloroformot tartalmazó keverékkel eluáljuk, mely keverék végső összetétele 15 % metanol kloroformban. Az egyesített frakciókból vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat alapján 1,13 g (az elméleti 39 %-a) kívánt terméket kapunk. Md = -21>°° (c = °>5= MeOH) A C30H4JN5O7 képlet alapján (Ms = 583.7) az analízis számított értékei: C 61.73,H 7.08, N 12.00 %. talált értékei: C 60,35, H 7,26, N 11,25 %. E. L-tirozil-D-alanil-glicil-(N“-etil)-L-fenilalanil-amidacetát só 1 g (1,71 mmól) D részben leírt terméket feloldunk 20 ml trifluorecetsavban, amely 3 ml anizolt és 3 ml (C2Hs)SiH-et tartalmaz. A keveréket 0 °C-on 30 percig keverjük, majd éterbe öntjük, a keletkező csapadékot egyesítjük és szárítjuk (660 mg). A szilárd anyagot megfelelő puffer oldatban (1 % piridin és 0,05 % ecetsav) feloldjuk úgy, hogy a térfogat 10 ml legyen, és ezt az oldatot 2,5 cmX90 cm nagyságú, előzőleg ugyanezzel a puffénál kezelt DEAE-Sephadex A-25 (acetát) oszlopra felvisszük. Az eluátum összetételét 280 nm-nél vizsgáljuk, az alkalmas frakciókat egyesítjük, majd liofilizáljuk. A szilárd anyagot 10 ml 0,2m ecetsavban feloldjuk, és az oldatot egy 2,5 cmX99 cm nagyságú, előzőleg ugyanezzel az oldószerrel kezelt G-10 Sephadex oszlopon kromatografáljuk. Az eluátum összetételét 280 nm-nél vizsgáljuk, a megfelelő frakciókat egyesítjük, ezután liofilizáljuk, és ily módon 448 mg (az elméleti 48 %-a) kívánt terméket kapunk. [<*]£ = -10,6° (c = 0,5, IN HC1). A C27H37N507 képlet alapján (Ms = 543,6) az analízis számított értékei: C 59.65. H 6,86, N 12.88 %, talált értékei: C 59,41 ' H 7,26’ N 13H8 %. Az aminosav analízis talált értékei: Tyr: 1,03, Alá: 0,99, Gly: 0,97, NH3 : 0,98. Az 1 általános képletű vegyületek hasznos fájdalomcsillapító aktivitással rendelkeznek, mely aktivitást egerekkel végzett forró lemez kísérleteink bizonyítják. A teszt folyamán az egeret egy függőleges akril hengerbe helyeztük, melyben egy forró felületű lemez volt, és ezt a lemezt 52 °C hőmérsékleten tartottuk. A kísérleti egérnek egy bőr alá (szubkután) adott injekció formájában alkalmas hordozóban feloldott vagy szuszpendált, előre meghatározott mennyiségű teszt vegyületet adtunk. Egy előre meghatározott, a kezelés számára megfelelő idő elteltével az egeret a forró felületű lemezre helyeztük. A latens állapot idejét, amely eltelt, addig, amíg az alábbi két tünetet észleltük, másodpercekben kifejezve jegyeztük fel. Először mértük azt az időt, vagyis azt a latens állapotot, amíg az egér a hátsó lábát megnyalta, és másodszor azt az időt, amíg az egér a forró felületről felugrott. Egy fájdalomcsillapító szer hatására 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
