182866. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új tetrapeptid-származékok előállítására
1 182 866 2 11,5 ml (0,12 mól) 1-jódpropánt cseppenként a keverékhez adunk, és még 2 órán át 0 °C-on keverjük. Ezután 10 ml jégecetet adunk hozzá, 10 percig keverjük, és összetört jégbe öntjük. Az így nyert vizes fázis pH-ját 2n nátriumhidroxid-oldattal 8,0-ra beállítjuk. A vizes keveréket éterrel kétszer extraháljuk, majd hideg 2n sósav hozzáadásával megsavanyítjuk úgy, hogy a pH 2,5 legyen. A vizes keveréket ezután etilacetáttal extrahál-juk. Az etilacetátos extraktumot vízzel egyszer extraháljuk, vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk, és vákuumban szirup sűrűségűre bekoncentráljuk. A szirupot 200 ml éterben feloldjuk, és 8 ml (0,04 mól) DCHADCHA-t adunk hozzá. A keletkezett csapadékot szűrjük, és a szűrletet egyszer l,5n citromsav-oldattal és vízzel extraháljuk. Az éteres fázist vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk, és vákuumban az oldószert elpárologtatjuk. Az így nyert olajat 40 cmX3 cm nagyságú Grace és Davison Grade 62 szilikagél oszlopra, kloroformban felvisszük. A terméket egy lépésenként csökkenő menynyiségű kloroformot tartalmazó keverékkel, mely keverék összetétele végül 5 % metanol kloroformban, eluáljuk. A vékonyrétegkromatográfiával vizsgált, egyesített frakciókból 3,6 g (31 %-a az elméleti értéknek) kívánt terméket különíthetünk el. Wd = -153,3° (C = 1 MeOH). A Ci7H25N04 képlet alapján (307,4) az analízis számított értékei: C 66,43, H 8,20, N 4,56 %, talált értékei: C 66,16, H 7,99, N 4,45 %. B. N0í-terc4>utiloxikarboniKNa-n-propil)-L-fenilalanilamid Az A részben leírtak szerint előállított N“-terc-butiloxikarbonil-(N0í -n-propil)-L-fenilalanint N ,N-dimetilformamidban (DMF) feloldjuk. A keveréket —15 °C-ra lehűtjük, majd először 1 ekvivalens izobutilklórformiátot és azután 1 ekvivalens N-metilmorfolint adunk hozzá. A keveréket —15 °C-on 10 percig keveijük, és ezután 30 percen keresztül vízmentes ammóniát buborékoltatunk át rajta. Ezt az elegyet -15°C-on 1 órán át keveijük, majd egy 200 ml jeget tartalmazó edénybe öntjük. A vizes oldatot etilacetáttal extraháljuk. A szerves fázist elkülönítjük, és először l,5n citromsav-oldattal, azután vízzel, In nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és végül újból vízzel mossuk. Az etilacetátos oldatot vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk, vákuumban az oldószert elpárologtatjuk, és ily módon a kívánt terméket nyerjük. C. N“-terc-butiloxikarbonil-L-tirozil-D-alanil-glicil(Na -n-propil)-L-fenil alanil amid 20 ml frissen előállított jégecethez, amely vízmentes hidrogénkloridot (In) és 2 ml anizolt tartalmaz, 1 ekvivalens Na-terc-butiloxikarbonil-(Na-n-propil)-L-fenil alanilamidot adunk. Az így nyert keveréket szobahőmérsékleten 30 percig keverjük, majd éterbe öntjük, és a keletkező csapadékot egyesítjük, szárítjuk. A hidrokloridsót ezután 30 ml DMF-ban feloldjuk. Az oldatot 0 °C-ra lehűtjük, és 1 ekvivalens diciklohexilamint adunk hozzá. Az elegyet néhány percig keverjük, majd 1 ekvivalens Nőiére - butiloxikarbonil - O - benzil - L - tirozil - D - alanilglicint (az 1E példa szerint előállítva), 1 ekvivalens HBT-t és 1 ekvivalens DCC-et adunk hozzá. A keveréket 0 °C-on 2 órán át, majd 4 °C-on további 24 órán át keverjük. A keveréket lehűtjük 0 °C-ra és szűrjük. A szűrletet vákuumban bekoncentráljuk, és az így nyert olajat etilacetátban újból feloldjuk. Az etilacetátos oldatot először In nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, azután vízzel, hideg 0,75n citromsav-oldattal és végül újból vízzel extraháljuk. A szerves fázist vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk, és vákuumban bekoncentráljuk. A vissza^ maradó olajat egy 40 cmX3 cm nagyságú Grace és Davison Grade 62 szilikagél oszlopon kloroformban kromatografáljuk. A terméket egy lépésenként csökkenő mennyiségű kloroformot tartalmazó eleggyel eluáljuk, mely elegy végső összetétele 10 % metilalkohol tartalmú kloroform. Az egyesített frakciók vékonyrétegkromatográfiás vizsgálata alapján izolálható termék az N“-tercbutiloxikarbonil - O - benzil - L - tirozil - D - alanil - glicil(N“ -n-propil)-L-fenilalanilamid. A fenti bekezdésben leírt terméket 60 ml etilalkoholban feloldjuk, és 1,5 g, vízben szuszpendált 5 %-os palládium-szén katalizátort adunk hozzá. A reakciókeverékbe egy gáz diszperziós csövön keresztül 5 percen át nitrogént, majd 6 órán át hidrogéngázt buborékoltatunk. A reakciókeveréket ezután nitrogéngázzal átmossuk, és a palládium katalizátort szűréssel eltávolítjuk. A keveréket vákuumban szirup sűrűségűre bekoncentráljuk. A szirupot kloroformban feloldjuk, és az oldatot 40 cmX3 cm nagyságú Grace és Davison Grade 62 szilikagél kromatográfiás oszlopon abszorbeáljuk. A terméket egy lépésenként csökkenő mennyiségű kloroformot tartalmazó eleggyel eluáljuk, melynek végső összetétele 10 % metilalkohol kloroformban, és az egyesített frakcióknak vékonyrétegkromatográfiás vizsgálata alapján izoláljuk. [a]£ =-34,8° (c = 0,5, MeOH). A C31H43N507 képlet alapján (Ms = 597.7) az analízis számított értékei: C 62.29. H 7,25. N 11.72 %. talált értékei: C 62,13, H 7,24, N 11,70 %. D. L-tirozil-D-alanil-glicil-(Na:-n-propil)-L-fenilalanilamid-acetátsó 800 mg (1,34 mmól) C részben leírt terméket 0,5 ml anizolt tartalmazó 10 ml trifluorecetsavban feloldunk. A keveréket 30 percig 0°C-on keveijük, majd a reakciókeveréket liofilizáljuk. A szilárd anyagot megfelelő puffer oldatban (1 % piridin és 0,05 % ecetsav) feloldjuk úgy, hogy a térfogat 10 ml legyen, és ezt az oldatot egy előzőleg ugyanezzel a pufferral kezelt, 2,5 cmX99 cm nagyságú DEAE-Sephadex A-25 (acetát) oszlopra felvisszük. Az eluátum összetételét 280 nm hullámhossznál vizsgáljuk, az alkalmas frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk. lm ecetsavból való ismételt liofilizálás után 655 mg kívánt terméket kapunk. [a]p = -11,0° (c = 0,5, ln HC1) A C28H3gNs07 képlet alapján (Ms = 557,6) az analízis számított értékei: C 60.31. H 7,05. N 12.56 %. talált értékei: C 60,23, H 6,98, N 12,49 %. Az aminosav analízis talált értékei: Tyr: 0.99. Alá: 1,00, Gly: 1,01, NH3:0,96. 4. példa L - tirozil - D - alanil - glicil - (N<* - etil) - L - fenilalanilamid-acetátsó előállítása A. N“-butiloxikarbonil-(Na-etil)-L-fenilalanin 70 ml tetrahidrofuránhoz 10,6 g (0,04 mól) Na-butiloxikarbonil-L-fenilalanint adunk. Az így nyert keveréket 30 perc alatt, cseppenként egy mechanikusan kevert szuszpenzióhoz adjuk, mely szuszpenzió 0,12 mól káliumhidrid 220 ml tetrahidrofuránban és 0,5 g 18- korona-6-éter, 0 °C-on, nitrogén atmoszférában. A keveréket 0 °C hőmérsékleten további 10 percig keverjük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 50 65 9
