182866. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új tetrapeptid-származékok előállítására
1 182 866 2 való lehűtés és éter hozzáadása után a tozilátsó kicsapódik. Ezt a csapadékot egyesítjük, szárítjuk, és ily módon 7,0 g (94 %) kívánt terméket nyerünk, melynek olvadáspontja 129—131°C. [a]p = -10,7° (c = 0,5, In MeOH). A C24H27NOsS képlet alapján (Ms = 441,5) az analízis számított értéke: N 3,17 %, talált értéke: N 2,87 %. B. Na-terc-butiloxikarbonil-0-bcnzil-L-tirozil-D-alanilglicil-L-(a-metil)-fenilalanin-benzilészter 80 ml DMF-hoz 5,74 g (0,013 mmól) A részben leírt terméket adunk. Az így nyert keveréket 0 °C-ra lehűtjük, és 5 perc múlva 6,5 g (13 mmól) N“-terc-butiloxikarbonil-Obenzil-L-tirozil-D-alanil-glicint (melyet az 1. példában leírtak szerint állítunk elő), 1,8 g (13 mmól) HBT-t és 2,7 g (13 mmól) DCC-et adunk hozzá. A keveréket 0 °C-on két órán át és szobahőmérsékleten 24 órán át keveijük. Ezután 0 °C-ra lehűtjük, és a keletkező csapadékot szűréssel eltávolítjuk. A szűrletet vákuumban beszárítjuk, a visszamaradó anyagot etilacetátban feloldjuk, és az etilacetátos oldatot először 1 n nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, ezután vízzel, 0,75n citromsav-oldattal és végül újból vízzel mossuk. A szerves fázist ezután vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk, és vákuumban bekoncentráljuk. Az így nyert olajat éterből kristályosítjuk, majd etilacetát-éter keverékből átkristályosítjuk, és ily módon 7,0 g (72 %) kívánt terméket nyerünk. OId = +7,9° (c = 0,5 MeOH). A C43H5oN4 0g képlet alapján (Ms = 750,86) az analízis számított értékei: C 68,78, H 6,71, N 7,46 %, talált értékei: C 68,75, H 6,46, H 7,21 %. C. NQ-terc-butiloxikarbonil-L-tirozil-D-a]anil-glicil-(L-ametil)-fenilalanin-diciklohexilaminsó 50 ml etilalkoholhoz 4,0 g (0,0053 mól) B részben leírt terméket adunk. Ezután 2,0 g 5 %-os palládium szén katalizátor dimetilformamidos sűrű szuszpenzióját adjuk hozzá. Egy gáz-diszperziós csövön keresztül 5 percig nitrogéngázt, majd 4 órán keresztül hidrogéngázt buborékoltatunk a keverékbe. A keveréket ezután nitrogéngázzal átmossuk, és a palládium katalizátort szűréssel eltávolítjuk. A szűrletet vákuumban szirup sűrűségűre bekoncentráljuk. A kloroformban felvett szirupot egy 10 cmX2 cm nagyságú Grace és Davison Grade 62 szilikagél oszlopra felvisszük, majd az anyagot lépésenként csökkenő mennyiségű kloroformmal, -» kloroform:metanol (9,5:0,5) eluáljuk. A fő frakciókat egyesítjük, és az oldószert elpárologtatjuk. A visszamaradt olajat etilacetátban feloldjuk, majd 1 ml diciklohexilamint adunk hozzá. A keletkező csapadékot egyesítjük, szárítjuk, és ily módon 2,6 g (65 %) kívánt terméket kapunk, melynek olvadáspontja 142—146 °C. [°0d = +46,3° (c = 0,5, MeOH). D. Na-terc-butiloxikarbonil-L-tirozil-D-alanil-glícil-(L- a-metil)-fenilalanilamid 2,0 g (0,0027 mól) C részben leírt terméket etilacetát és 0,27n citromsav-oldat keverékével semlegesítjük. A szerves fázist elkülönítjük, vízzel extraháljuk, vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk, vákuumban bekoncentráljuk, és ily módon 1,5 g olajat nyerünk. Az így nyert szabad savat 30 ml DMF-ban feloldjuk, és egy nyomásálló palackban lehűtjük 0 °C-ra. 560 mg (0,0027 mól) DCC-et adunk hozzá, és a keveréket 0 °C-on 4 órán át, majd ezt követően 3 órán át szobahőmérsékleten keveijük. Az edényt ezután —78 °C-ra lehűtjük, és 30 ml vízmentes ammóniát adunk hozzá. Az edényt újból lezárjuk, és a keveréket szobahőmérsékleten 48 órán át keveijük. A keveréket ezután —78 °C-ra lehűtjük, az edényt kinyitjuk, és az ammóniát szobahőmérsékleten hagyjuk eltávozni. Az oldószert ezután vákuumban eltávolítjuk. A visszamaradó anyagot etilacetátban feloldjuk, és az etilacetátos oldatot először 0,75n citromsav-oldattal, azután vízzel extraháljuk. Az oldatot vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk, és az oldószert vákuumban elpárologtatjuk. A visszamaradó anyagot kloroformban feloldjuk, és az oldatot egy 3 cmX45 cm nagyságú Grace és Davison Grade 62 szilikagél oszlopra felvisszük. Az oszlopot egy lépésenként csökkenő mennyiségű kloroformot (-> kloroformmetanol arány 9:1) tartalmazó eleggyel eluáljuk. A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok alapján egyesített frakciókból az oldószer elpárologtatása után 1,1 g (72 %) kívánt terméket nyerünk. [a]jj = -26° (c = 0,4 MeOH). Az aminosav analízis talált értékei: Gly: 0,99, Alá: 1,00, Tyr: 0,99, NH3 :1,12. E. L-tirozil-D-alaníl-glicil-L-(a-metil)-fenilalanilamidacetátsó In gázhalmazállapotú hidrogénklorid jégecetben és 0,3 ml anizol keverékének 20 ml-éhez 900 mg (0,0016 mól) D részben leírt terméket adunk. A keveréket szobahőmérsékleten 30 percig keveijük, majd éterbe öntjük. A keletkező csapadékot egyesítjük és szárítjuk (720 mg). A szilárd anyagot megfelelő puffer oldatban (1 % piridin és 0,05 % ecetsav) feloldjuk úgy, hogy a térfogat 5 ml legyen, és az oldatot előzőleg ugyanezzel a pufferral kezelt 2,5 cmX99 cm nagyságú DEAE-Sephadex A—25 (acetát) oszlopra felvisszük. Az eluátum összetételét 280 nm-nél vizsgáljuk, az alkalmas frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk. 10 %-os ecetsavból történő ismételt liofilizálás és víz-acetonitril 75:25 arányú keverékéből történő liofilizálás után 400 mg kívánt terméket nyerünk. Md = +23,9° (c = 0,5 ln HC1). A C26H3sNs07 képlet alapján (Ms = 529,60) az analízis számított értékei: C 58,97, H 6.66. N 13.22 O 21.15 %. talált értékei: C 59,02, H 6,36, N 12,99, 0 21,41%. Az aminosav analízis talált értékei: Tyr: 0,96, Alá: 1,01, Gly: 1,00, NH3 : 1,03. 3. példa L - tirozil - O - alanil - glicil - (N"-propil)-L- fenilalanilamid-acetátsó előállítása A. N^-terc-butiloxikarbonil-ÍN^-n-propilJ-L-fenilalanin 70 ml tetrahidrofuránhoz 10,6 g (0,04 mól) NQ'-tercbutiloxikarbonil-L-fenilalanínt adunk. Az így nyert keveréket cseppenként, 30 perc alatt, 220 ml tetrahidrofuránban levő 0,12 mól káliumhidrid és 0,5 g 18- korona-6-éter mechanikusan kevert szuszpenziójához adjuk, 0 °C-on, és nitrogén atmoszférában. A keveréket további 10 percen át keverjük. Ezután 23,3 ml (0,24 mól) 1-jódpropánnak 40 ml tetrahidrofuránnal alkotott oldatát 20 perc alatt cseppenként hozzáadjuk. A keveréket 2,5 órán át 0 °C hőmérsékleten tartjuk, majd 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
