182866. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új tetrapeptid-származékok előállítására
1 182 866 2 két nyerünk. Etilacetátból történő átkristályosítás után a termék súlya 13,70 g (az elméleti 68 %-a) és olvadáspontja 136—139 ”C. Md = ~28,2° (c= l,EtOH). A C23H32N204-re képlet alapján (Ms = 400,50) az analízis számított értékei: C 68.97, H 8.05. N 6.99 %. talált értékei: C 68,75, H 7,81, N 6,74 %. G. N“-terc-butiloxikarbonil-(N“-metil)-L-fenil-alanilamid 4,0 g (0,01 mól) N“-terc-butiloxikarbonil-(N“-metil)L-fenilalanint, melyet a d(+)-a-metilbenzilaminsó megsavanyításával és éterbe történő extrakciójával állitunk elő, 20 ml N,N-dimetilformamidban (DMF) oldunk. Az elegyet -15 °C-ra lehűtjük, 1,56 ml (0,012 mól) izobutil-kloroformátot, majd 1,32 ml (0,012 mól) N- metilmorfolint adunk hozzá. A reakciókeveréket 10 percen keresztül —15 °C hőmérsékleten keverjük, majd 1,5 órán át vízmentes ammóniát buborékoltatunk át rajta, és ezután még 1 órán át -15 °C hőmérsékleten keverjük, majd a keveréket egy 200 ml jeget tartalmazó edénybe öntjük. A vizes oldatot etilacetáttal extraháljuk. A szerves fázist elkülönítjük, és először l,5n citromsav-oldattal, azután vízzel, In nátriumhidrogén-karbonát-oldattal és végül újból vízzel mossuk. Az etilacetátos oldatot vízmentes magnéziumszulfáton szárítjuk, vákuumban szirup sűrűségűre bekoncentráljuk. A szirupnak éter és petroléter keverékből történő kristályosításával 2,12 g (az elméleti 76. %-a) kívánt terméket nyerünk, melynek olvadáspontja 91—92 °C. [a]p = —Hl,2° (c = 0,5, CHClj). A C15H22N203-ra képlet alapján (Ms = 278,33) az analízis számított értékei: C 64,73, H 7,97, N 10,06 %, talált értékei: C 64,95, H 7,81, N 9,79 %. H. Na-terc-butiloxikarbonil-0-benzil-L-tirozil-D-alanil-glicil-(Na-metil)-L-fenilalanilamid Vízmentes hidrogénkloridot (In) és 2 ml anizolt tartalmazó 20 ml frissen előállított jégecethez 1,95 g (0,007 mól) NOÍ-terc-butiloxikarbonil-(N“-metil)-L-fenilalanilamidot adunk. Az így nyert keveréket szobahőmérsékleten, 30 percig keverjük. A keveréket ezután éterbe öntjük, a kiváló csapadékot egyesítjük és szárítjuk (1,5 g). A hidrokloridsót 30 ml DMF-ban feloldjuk, az oldatot 0°C-ra lehűtjük, majd 1,4 ml (0,007 mól) diciklohexilamint adunk hozzá. A keveréket néhány percig keverjük, és ezután 3,5 g (0,007 mól) N“-terc-butiloxikarbonil-O-benzil-Ltirozil-D-alanil-glicint, 950 mg (0,007 mól) FIBT-t és 1,4 g (0,007 mól) DCC-et adunk hozzá. A reakciókeveréket ezután 0 °C hőmérsékleten, 2 órán keresztül, majd 4 °C-on 24 órán keresztül keverjük. A keveréket 0 °C-ra lehűtjük és szűrjük. A szűrletet vákuumban bekoncentráljuk, és az ily módon nyert olajat etilacetátban újból feloldjuk. Az etilacetátos oldatot először In nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, azután vízzel, 0,75 n citromsav-oldattal és végül újból vízzel extraháljuk. A szerves fázist vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk, és vákuumban bekoncentráljuk. Az így nyert olajat 40 cmX3 cm nagyságú, Grace és Davison Grade 62 szilikagél oszlopon kloroformban kromatografáljuk. A terméket egy lépésenként csökkenő mennyiségű kloroformot tartalmazó keverékkel eluáljuk, mely keverék végső összetétele 10"% metilalkohol kloroform ban. Az egyesített frakciók vékonyrétegkromatográfiás vizsgálata alapján izolált termék 3,55 g súlyú (az elméleti érték 77 %-a). Md = -9,2° (c = 0,5 MeOH). A C36H4sN50-7 képlet alapján (Ms = 659,8) az analízis számított értékei: C 65.54, H 6.57, N 10.61 %. talált értékei: C 65.46, H 6,58, N 10,36 %. I. N^-terc-butiloxikarbonil-L-tirozil-D-alanil-glicil-N“metil-L-fenilalanilamid 3,2 g (0,0485 mól) FI részben leírt terméket 60 ml etilalkoholban feloldunk, és 1,5 g, vízben szuszpendált 5 %-os palládium-szén katalizátort adunk a keverékhez. Ezután a reakcíókeverékbe gáz-diszperziós csövön keresztül 5 percen át nitrogéngázt, majd 6 órán át hidrogéngázt buborékoltatunk. A reakciókeveréket ezután nitrogénnel átmossuk, és a palládium katalizátort szűréssel eltávolítjuk. A keveréket vákuumban szirup sűrűségűre bekoncentráljuk, a szirupot kloroformban feloldjuk, és egy 40 cmX3 cm nagyságú kromatográfiás oszlopra, amely Grace és Davison Grade 62 szilikagélt tartalmaz, abszorbeáljuk. A terméket egy lépésenként csökkenő mennyiségű kloroformot tartalmazó keverékkel, mely végül 10 % metilalkoholt tartalmazó kloroform keverék lesz, eluáljuk, és az egyesített frakciók vékonyrétegkromatográfiás vizsgálata . alapján ' oláljuk, elkülönítjük. Ily módon 2,0 g (az elméleti 74 %-a) terméket nyerünk. Md = -9,9° (c = 0,5, MeOH). Az aminosav analízis talált értékei: Gly: 1,01, Alá: 0,99, Tyr: 0,99, NH3:1,14. J. L-tirozil-D-alanil-glicil-(N“-metil)-L-fenil-alanilamid acetátsó 1,6 g (0,00281 mól) I részben leírt terméket 0,5 ml anizol tartalmú 10 ml trifluorecetsavban feloldunk. A keveréket 0 °C-on 30 percig keveijük, ezután éterbe öntjük, a keletkező csapadékot egyesítjük és szárítjuk (1,1 g). A szilárd anyagot egy megfelelő puffer oldatban (1 % piridin és 0,05 % ecetsav) feloldjuk úgy, hogy 15 ml legyen, és ezt az oldatot egy 2,5 cmX99 cm nagyságú DEAE-Sephadex A-25 (acetát) oszlopra felvisszük, mely oszlopot előzőleg ugyanezzel a puffénál kezeltünk. Az eluátum összetételét 280 nm-nél vizsgáljuk, az alkalmas frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk. 10 %-os ecetsavból történő ismételt liofilizálás, majd ezt követően 75:25 arányú víz-acetonitril keverékből történő liofilizálás után 0,84 g kívánt terméket nyerünk. [a]p = +27,8° (c= 1, InHCl). Aminosav analízis talált értékei: Tyr: 0,98, Alá: 1,03, Gly: 1,00,NH3 :1,05. 2. példa L-tirozil-D-alanil-glicil-L(a-metil)-fenilalanilamid acetátsó előállítása A. L-(ú!-metil)-fenilalanin-benzilészter tozilátsó 100 ml benzolhoz 3,0 g (0,0168 mól) L-(a-metil)fenilalanint adunk. Az így nyert szuszpenzióhoz ezután 3,5 g (1,1 ekvivalens) p-toluolszulfonsav-hidrátot és 10 ml benzilalkoholt adunk. A keveréket egy Dean-Stark vízzárral és visszafolyató hűtővel ellátott edényben négy napon át forraljuk. A keverékből szobahőmérsékletre 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
