182554. lajstromszámú szabadalom • Eljárás intrvénásan alkalmazható szérumfehérje-készítmény előállítására
5 182554 6 ként különösen a leírt frakcionálási eljárás IV, valamint III—1 és III—2 frakcióit („P 3”, „P 5” és ,,P 6” csapadék) alkalmazzuk. Ezeket meghatározott arányokban keverjük össze és az össz-proteinre vonatkoztatva 23—50% albumin, illetve 50—77% globulin arányt állítunk be. Ily módon a III—1 és III—2 frakció megfelelő növelésével az IgM és IgA formájú globulinok mennyiségét specifikusan megnöveljük. Egy előnyös eljárásváltozatnál a IV, III—1 és III—2 frakciókat (üledékek) konyhasó-oldatban, illetve alkalmas puffer-oldatban mindenkor a 100%-nak megfelelő össz-proteintartalomra vonatkoztatva a következő mennyiségekben szuszpendáljuk : IV frakció: 30—80 súlyszázalék, III—1 frakció : 5—70 súlyszázalék, TII—2 frakció: 5—70 súlyszázalék. Az is lehetséges, hogy a szérumfehérje-készítményt csak a III—1, III—2 vagy a IV frakcióból nyerjük, és hogy ezeket a specifikus plazmaproteinekkel történő dúsítás céljára az egyes frakciókból stabil, oldott formájú készítményként állítsuk elő. Éppen így, egyedi előállítással a III—1, III—2 és a IV frakciókat tartalmazó végtermékekből a kívánt keverési arányokat állíthatjuk elő az egyes frakciókat tartalmazó készítmények kombinálása útján. A meghatározott arányban összekevert és alkalmas puffer- vagy só-oldatban szuszpendált anyagokat előtisztításnak vetjük alá. Az előtisztításában az a- és (i-globulin-turtomány lipid faktorait alkalmas adszorbensen végzett adszorbeáltatással (Aerosil, bentoni vagy egyéb kovasav-tartalmú komplex vegyületek) eltávolítjuk. Ezt követően a terméket tisztára szűrjük, dializáljuk és elvégezzük az oldat töményítését. Külön sterilizálás általában nem szükséges. Ha azonban szükséges, azt önmagában ismert módon elvégezhetjük. Például a vírusok eltávolítására két eljárást alkalmazhatunk: a) Pasztörizálás 60 °C-on 10 órán át történő melegítéssel. Ennek az eljárásnak az a hátránya, hogy ilyen körülmények között számos szérumprotein denaturálódik. b) A fí-propiolakton-kezelés és az UV-besugárzás kombinálása (LoGrippo eljárása; Fed. Procedings 15, 518. [1959]). Ez az eljárás lehetővé teszi szérumok és plazmák kíméletes körülmények között történő sterilizálását, miközben azonban a tárolásállóság nem növekszik. Lényegében a találmány tárgyát képező eljárás szerint a kiindulási komponensek keverékét meghatározott protein tartalomra és meghatározott protein arányra történő beállítás után hasonló eljárásnak vetjük alá, mint amilyen a szérumra ismeretes (lásd a bevezetőben megadott irodalmi helyet). A találmány szerinti eljárással egy olyan új szérumfehérje-készítményt nyerünk, amely nagyobb IgM, illetve IgA immunglobulin-tartalmán alapulva hatásában az ismert készítményeket túlszárnyalja. Magától értetődően lehetőség van arra is, hogy az egyes frakciókat szabadítsuk meg a denaturálódásra hajlamos komponensektől, és ezt követően keverjük, töményítsük és stabilizáljuk a tisztított anyagokat. Az adszorbenssel végzett munkát előnyösen 200— 500 mg szilikagél g össz-protein koncentrációnál és 50 °C-ig terjedő hőmérsékleten végezzük. Az anyagokat alaposan összekeverjük, és ezt követően a lipoproteineket felvett adszorbenst leválasztjuk. Megállapítottuk, hogy 20 és 50 °C közötti hőmérsékleteknél, illetve 6,5 és 8 közötti pH-értékeknél lehet a legjobb eredményeket elérni. A találmány megvilágítására szolgálnak a következő kiviteli példák : 1. példa 300 1 konyhasó-oldathoz (1,7 súlyszázalék nátriumklorid-tartalmú desztillált víz, melyet 0,2 n sósavoldattal 4,6 pH-ra állítunk be) 10 kg következő összetételű IV Cohn-frakciót adunk, és szuszpenziót képezünk : 55% albumin, 10% aj-globulin, 8% a2-globulin, 15% (3-globulin, 12% y-globulin. A IV frakció mintegy 50% szilárd anyagot (fehérje, sók) és 50% maradék nedvességet (víz, maradék etanol) tartalmaz. Hozzáadunk továbbá 5 kg következő szilárd komponens összetételű (súlyszázalékban) III—1 Cohnfrakciót (szubfrakció) : 15% albumin, 2% a1-globulin, 13% a2-globulin,‘ 17% 3-globulin, 53% y-globulin, és 5 kg következő összetételű III—2 Cohn-frakoiót (szubfrakció) : 8% albumin, 3% (Xj-globulin, 9% a2-globulin, 25% ß-globulin, 55% y-globulin szuszpendálunk benne. A szilárd anyagok és a maradék nedvesség aránya gyakorlatilag az összes frakciónál azonos. A 20 kg „nedves” frakciót szuszpendáljuk és elkeverjük az oldószerben. A pH-értéket eközben 4,6 értéken tartjuk állandóan. A frakciókban levő, oldható anyagok feloldódnak az oldószerben. Az emellett jelenlevő oldhatatlan komponensek zavarosságot okoznak. Az oldhatatlan anyagok az összes szilárd anyag tartalom mintegy 12 súlyszázalékát teszik ki. Az oldhatatlan anyagok között különösen olyan denaturált globulinok, beleértve a lipoproteineket is, vannak, melyekre az eljárás során tovább nincs szükség. Az utóbbiakat ezért egy eentrifugálási lépés segítségével eltávolítjuk. A felül úszó gyengén zavaros és sárgás színű. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
