182554. lajstromszámú szabadalom • Eljárás intrvénásan alkalmazható szérumfehérje-készítmény előállítására
7 182554 0,2 n nátrium-hidroxid-oldat hozzáadásával a pH- értéket 7,4-re állítjuk be. Az oldathoz 5 súlyszázalék koncentráció eléréséig tiszta, kolloid kovasavat adunk és elkeverjük. A folyadékot 45 °C-ra melegítjük (mintegy 1 °C/perc sebességgel), és a pH-t konstans értéken tartjuk. A 45 °C-os véghőmérséklet elérése után a folyadékot 4 órán át keverjük. Ezen eljáráslépés során a tárolás-instabil proteinek megkötődnek a kovasavon és csapadékot képeznek, amit eentrifugálással eltávolítunk. A centrifugálás után felül maradó folyadékot aktívszenes szűréssel (Seitz AKS-Filter gyártmány) derítő szűrésnek vetjük alá. Az ebből kikerülő szőriét egy tiszta, borostyánkőszínű folyadék. A folyadékot dialízises koncentrálási eljárás segítségével (Millipore kazetta rendszer, membrán pórus-nagyság 10 000 Daltón) a kiindulási térfogat mintegy 25° ,',-ára koncentráljuk. Ezen lépés után az oldatnak mintegy 3,4— 4,5 súlyszázalék össz-fehérje-koncentrációja van. Az analízis azt mutatja, hogy a dilízises koncentrálási lépéssel lényegében a koncentrátumból az összes 10 000-nél kisebb molekulasúlyú vér-komponenst eltávolítottuk. Ezek közé tartoznak különösen azok a komponensek, amelyek egy fehérje-konzervben nem kívánatosak, például a vazoaktív hatású oligopeptidek. A koncentrátumot ezt követően az úgynevezett „tisztátalanságok” eltávolítására, valamint az elektrolitok beállítására háromszoros térfogatú 0,9 súlyszázalékos nátrium-klorid-oldattal szemben dialízisnek vetjük alá. A dialízist ugyanolyan berendezésben és ugyanolyan membránnal végezzük el, mint amilyent koncentrálásnál is használtunk. Egy további koncentrációs lépés csatlakozik ehhez, melynek végén 6—10%-os protein-koncentrációt kapunk. Ezt követően nátrium-klorid-oldat segítségével az emberi vérnek megfelelő, azzal izotóniás fiziológiás viszonyokat állítunk be és az össz-protein koncentrációt 5 súlyszázalékra hozzuk. Az 1. példa szerint nyert protein analízisét a következő táblázat mutatja : 2. táblázat (100 ml-re vonatkoztatva) protein 5000 mg albumin 2925 mg IgG 1500 mg IgA 380 mg IgM 285 mg A beállított oldatot járulékosan még egy csírátlanító szűrőn (EKS II; Seitz, Kreuznach) élesre szűrjük. A sterilre szűrés membrán szűrőn történik. A készítmény atnpullázva alkalmas az intravénás alkalmazásra. 2. példa 300 1 oldószerben az 1. példához hasonlóan feloldunk 7.5 kg IV Cohn-frakcíót, 4 kg III—1 Cohn-frakciót és 8.5 kg III—2 Cohn-frakciót. Ezen frakciók összetétele megfelel az 1. példában megadottaknak. A frakciókat összekeverjük az oldószerrel, és a pH-t 4,6-on tartjuk. Az oldathoz 60 g Aerosil 2491/380 jelű terméket adunk literenként, és a pH-t 7,6-ra állítjuk be. A keveréket 47 °C-on 4 órán át keverjük, ezt követően 18 °C-ra lehűtjük, és kiszűrjük a lebegő anyagokat belőle. A lebegő anyagok kiszűrését egy CHF—S típusú (Schenk Filterbau, Schwab. Gmünd gyártmányú), függőlegesen álló uszadékszűrővel hajtjuk végre. Szűrési segédanyagként a szűrendő anyagra számolva 3 súlyszázalék koncentrációban Hyílo Super Cel jelű terméket alkalmazunk. Szűrési segédanyagként 5% koncentrációban Celite 545 jelű infuzóriaföldet is alkalmazhatunk. 8 3. példa Tisztítás után az egyes oldatokat egyesítjük, és az 1. példának megfelelően dialízises koncentrálási eljárásnak vet jük alá. Az oldatokat azonban ugyanígy tetszés szerint végkoneentrátummá is feldolgozhatjuk, ahogyan azt az I. példában leírtuk, tetszés szerint magában vagy tetszés szerint egymással összekeverve. 4. példa 200 1 foszfát-citrát puffer-oldatban (0,066 mól foszfát-citrát) mintegy 3 óra alatt 10 kg III—1 frakciót és 10 kp III—2 frakciót oldunk. A pH-t 7,50-re állítjuk be; az említett puffer-oldat további hozzáadásával 300 1-re történő felhígítása és 100 g/liter (2:1 arányú) Aerosil-bentonit keverék hozzáadása után a keveréket 4 órán át 45 °C-on keverjük. 10 °C-ra történő lehűtése után a szuszpenziót tisztára szűrjük egy zagyszűrőn 50 l/m2/óra szűrőteljesítménnyel 1,0 kg diatómaföld- Celit 545/m2 szűrőrétegen. Ezután élesre szűrés (Seitz AKS4 szűrővel) valamint diakoncentrálás következik, miként azt az 1.—3. példákban leírtuk. A felhasználásra kész oldat vég-koncentrációját 5% fehérjére állítjuk be. így a következő átlagos összetétel adódik : 5. táblázat protein 5000 mg albumin mintegy 1800—2000 mg globulinok 3000—3200 mg IgG mintegy 1450 mg IgA mintegy 700 mg IgM mintegy 500 mg 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
