182462. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nukleinsavak keverékeinek affinitáskromatográfiás szétválasztására
13 182 462 14 karbonát oldattal kirázzuk. A kloformos fázist elválasztjuk, nátrium-szulfáton szárítjuk és szűrjük, majd 50 °C-on vákuumban kb. 100 ml térfogatig sűrítjük és közvetlenül alakítjuk át to'vább (halvány ibolya színű oldat), le. Az amino-vegyület fentiek szerint kapott 100 ml térfogatú kloroformos oldatát elkeverjük 50 ml metil-alkohollal. Az oldathoz 10 g vízmentes nátrium-karbonátot és spatulahegynyi 1,3-dinitro-benzolt, majd ezt követően, keverés és jeges hűtés (0 °C—5 °C) közben cseppenként 1,81 g = 1,65 ml akriloil-kloridot (kétszeres mólnyi mennyiség) adunk. A keletkezett szuszpenziót egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük,* majd a - nátrium-karbonátot leszívatjuk és a szüretet vákuumban, 35—40 °C-on bepároljuk. A maradékot felvesszük 100 ml kloroformmal és 50 ml vízzel és kirázzuk, elválasztjuk a kloroformos fázist, azt 50 ml vízzel újból kirázzuk, az elválasztott fázist nátrium-szulfáton szárítjuk és vákuumban, 35—40 eC-on bepároljuk. Az olaj szerű, zöldesszínű maradékot 20 ml izopropil-alkohollal eldörzsöljük és kristályosítás céljából hűtőbe állítjuk. A kivált kristályokat nuccszűrőn leszívatjuk, izópropil-alkohollal és éterrel mossuk, végül szárítószekrényben szárítjuk. Az 1b. és le. lépések kitermelése: 2,9 g menynyiségű (ez az elméleti hozam 72,7%-a), 175 °C-on olvadó termék. C, H, N-analízis : Számított: C 78,2 H 7,27 N 10,52 Talált: C 75,9 H 7,21 N 9,999 NMR-spektrum (hexa-deutero-dimetil-szulfoxidban) : CH3-(N-metíl) S 2,83 ppm ; = CH-(akril) Q 5,7 ppm, CH2 = (akril) P 6,3 ppm, aromás protonok 6,5 és 7,5 ppm között, ld. 250 mg (0,001 mól) klóranilt 15 ml tetrahidrofuránban oldunk és az oldatot elkeverjük 0,4 g (0,001 mól) — az le. lépés szerint előállított — akriloilvegyülettel. Az oldat azonnal elkékül és abban kb. 2 órai, szobahőmérsékleten történt pihentetés után megindul a kristályosodás. A rendszert egy éjszakán át még szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd a kristályosodott anyagot nuccszűrőn leszívatjuk, tetrahidrofuránnal és éterrel mossuk, végül szárítószekrényben szárítjuk. Az anyagot további tisztítás céljából ismét felvesszük vízzel, sósavval közömbösítjük, majd etil-acetáttal kirázzuk. A tiszta terméket a vizes oldatból nátrium-klorid hozzáadásával csapjuk ki. A kitermelés: 0,335 g (az elméleti hozam 84,2%-a). ■ Az ld. lépésben kapott vegyület NMR-spektrumában az le. lépés szerint termékéhez képest az N-metil-protonjel 3,3 ppm-re történő eltolódása figyelhető meg. 4. példa. Az akriloil-amino-fenil-neutrálvörös előállítása. la. 6,9 g (0,05 mól) 4-nitro-anilint feloldunk 150 ml 1:1 arányú tetrahidrofurán—kloroform elegyben, majd az oldatot elkeverjük egy spatulahegynyi 1,3-dinitro-benzollal és 8 ml trietil-aminnal. A reakciókeverékben ezután 10—20 °C-on, keverés közben lassan 9 ml (0,1 mól) akriloil-kloridot csepegtetünk. Az oldatot egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, amikoris trietilammónium-klorid válik ki - kristályosán.' A tetrahidrofurán-kloroform oldószerelegyet ezután vákuumban, 50 °C-on elpároljuk, a maradékot vízzel eldörzsöljük, nuccszűrőn szűrjük, majd izopropil-alkohollal és éterrel mossuk. A terméket vákuumban 50 °C-on szárítjuk. lb. 2,5 g 2. sz. akriloilvegyületet keverés közben, 50 °C-on feloldunk 60 ml tetrahidrofuránban. Az oldatot 60 ml 99%-os jégecettel hígítjuk és 30 °C-ra hűtjük. Ezután adagonként 10 g cinkport- adunk hozzá, miközben a hőmérséklet a jeges hűtés közben is 35—40 °C-ra emelkedik. A rendszert szobahőmérsékleten még 10 percig keverjük, a felesleges cinkport nuccszűrőn leszívatjuk és jégeoettel mossuk. A szűrletet .vákuumban bepároljuk. Az olajszerű bepárlás maradék kromatográfiásan gyakorlatilag tiszta és azt közvetlenül felhasználjuk a következő reakcióhoz. le. 4,2 g (0,02 mól) N, N-dimetil-p-fenilén-diammónium-diklorid és 2,88 g (0,02 mól) o-toluidinium-klorid 400 ml vízben készített oldatát szobahőmérsékleten elkeverjük 12 g (0,04 mól) nátrium-kromát 100 ml vízben készült oldatával. A kivált zöldszínű terméket 15 perc múltán leszívatjuk, vízzel háromszor mossuk, miközben a mosóoldat zöldszínű marad, a csapadékot pedig azonnal továbbfeldolgozzuk oly módon, hogy azt kisebb mennyiségű vízben szuszpendáltatjuk és hemogenizáljuk. A homogén szuszpenziót vízzel 1,6 liter térfogatra hígítjuk, 100 ml vízben oldott 1,15X0,02 mól N- akriloil-p-fenilén-diammónium-acetát hozzáadása után a reakciókeverék pH-ját 130 ml 3 mólos nátrium-acetát oldat hozzáadásával 4,9- re állítjuk be. A keveréket ezután állandó keverés közben forráspontig melegítjük. Az oldat eközben előbb sötétkékre, majd a forrásnál sötétibolyára színeződik (a reakció teljessé tétele érdekében a rendszert 5 percig forrni hagyjuk). A még forró oldatot nuccszűrőn leszívatjuk, a kb. 2 liter mennyiségű szüretet 240 g nátriumklorid hozzáadásával 2 mólosra állítjuk be és egy éjszakán át hűtőszekrényben állni hagyjuk. A kivált kristályokat nuccszűrőn leszívatjuk és szárítószekrényben szárítjuk (vízzel mosni nem szabad, minthogy az anyag vízben könnyen oldódik). A kitermelés: 2,4 g nyerstermék. A további tisztítás céljára a nyerstermékből 1,3 g-ot feloldunk 25 ml metil-alkoholban és 0,1 mólos nátrium-klorid oldatban (4:1 arány), majd az oldatot 95X4 cm méretű szilikagél 60 oszlopra visszük. Az eluálást ugyanazzal a oldószerrel végezzük. 20 ml térfogatú frakciókat gyűjtünk. A 22—55. frakciókat egyesítjük és vákuumban kb. 15 ml térfogatra pároljuk be. A kivált kristályokat nuccszűrőn leszívatjuk, kevés 0,1 mólos nátrium-klorid oldattal mossuk, végül szárítószekrényben szárítjuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
