182442. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunoglobulinok meghatározására
9 182 442 10 (Redprok RF-Teljes anti-HAV-ELISA (+) ^nti-HAV-IgM vizsgálati eredmények Sorszám .i,S2Á ___________LTM“J±>L_ .V-ttoaselg—HRP IgG HRP F(ab’)2-HRP Waaler) IgG IgM 1 16 „ 2 32 + — — + — 3 32--— — — — 4 64 + — — + — 5 64 + — + + — 6 64 + — — + — 7 128 — — — + — 8 128 — — — + — 9 128 + — — + — 10 256 + — + + — 11 256 + — — + — 12 512 + — + + — 13 512 + — + + — 14 512 — — — + — 15 1024 — — — + — 16 1024 + — + + — 17 . 2048 — — — + — 18 2048 — __ + + — 19 2048 — — + + — 20 2048 + — + + — Póz. kontroll Neg. kontroll 1 Neg. kontroll 2 — + + — — {+) enzimhez kötött immunoszorbens-vizsgálat szorpciója. Az RF tartalmat az RF titer reciprokával jelöltük, amelyet Rose-Waaler-Ale vizsgálat (olyan vizsgálat, amelynek során a reumatóid faktorra vizsgált szérumnak nyúl anti-ibárány eritrodta szérummal bevont bárány-Heritrotíták agglutinádóját előidéző képességét vizsgáljuk az agglutinációt éppen csak előidézni nem tudó konoentrádóban, itt tehát a nyúl-immunoglobulin specifikusan kötődik a bárány-eritrocitákhoz és reumatoid faktorral szemben antigénként (hat) szerint határoztuk meg. III. példa Enzim immuno-vizsgálat human toxoplazma IgM-antitestek kimutatására és meghatározására. Juhot human IgM-mel immunizáltunk, amelyet Waldenstrom-féle makroglobulinémiás szérumból készítettek. Az igy nyert antiszérumnak a specifikusságát emberi köldökzsinór szérumá- 55 nak a felhasználásával, abszorpciós úton növeltük, mely eljárással az antiszérum anti-IgG-aktivitását eltávolítottuk. A juh anti-human IgM szérum 1 ml-ét összekevertük 0,5 ml emberi köldökzsinór-szérummal, és 1 óráig 37 °C-on inkubáltuk. A szupernatánst használtuk fel mint anti-IgM szérumot; 4 °C-on tároltuk. B. A toxoplazma antigén készítése Toxoplazma gondii parazitákat tenyésztettünk 3 napig az egér intraperitoneális üregében. A 6 35 fejteket az egér megölése után összegyűjtöttük oly módon, hogy a hasüreget 1 ml foszfátpufferrel (FP, pH = 7,2) kiöblítettük. Az FP-ben levő sejtek szuszpenzióját kis intenzitású ultrahanggal kezeltük 5 percen át. Az ép parazitasejte- 40 két centrifugiálással tömörítettük, és 7,2-es pH- ju FP-ben reszuszpendáltuk, majd 10 percig nagy intenzitású ultrahanggal kezeltük. Ezt a szuszpenziót alkalmaztuk mint antigén készítpaényt, amelyet lefagyasztottunk és —20 °C-on 45 tároltuk. C. Toxoplazma antigén elleni IgG Ffab’^-fragmensek készítése Juhot immunizáltunk 1 mg fentiekben emlí- 50 tett toxoplazma antigén készítménnyel. A szérumot összegyűjtöttük, és az IgG-t M. Steinbuch és R. Audran kaprilsavas módszere (Ardh. Biochem. and Biophysics; 134, 279—284 (1969)) alapján elkülönítettük. F(ab’)2-fragmenseket az IgG oldatnak 4,3 pH-ju 0,1 mólos acetát-pufferben 8 óráig 37 °C-on végzett ipepszines (ahol a ipepszin és az IgG aránya 1:50) inkubálásával állítottuk elő. A reakciót megfelelő mennyiségű szilárd trisz- 60 (hidroximetil)-amino metán hozzáadásával (miközben a pH értéke 8-ra emelkedik) leállítottuk. A fragmenseket Sephacryl S 200 oszlopon végzett (0,1 mólos TRIS/HC1, pH 7,5 0,2 mólos NaCl + 0,002 mólos EDTA) gélkromatográ- 65 fiával tisztítottuk.
