182144. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hipikoleszrterémiás hatású vegyületek előállítására fermentációs úton
182,144 éa amelynek a pH-ja 7*0 éltékre van beállítva, A táptalajt ezután 15 percen át 121°C-on sterilizáljuk, majd hozzáadunk a fentebb említett második fermentálásnál kapott tenyészetből 1 litert. A rendszert ezután 85 fordulat/pero sebességgel 12 órán át, 130 fordulat/perc sebességgel 280C-on 2,35 liter/szekundum sebességű levegőztetés mellett 12 órán át és végül 4,7 liter/ szekundum sebességű levegőztetés mellett 84 órán át inkubáljuk. B. Elkülönítés 1. Extrahálás Az A. lépés szerint végzett fermentálásnál kapott teljes tenyészet 380 liternyi mennyis égét összeöntjük egy azonos módon végrehajtott fermentálás eredményeképpen kapott tenyészet 380 liternyi mennyiségével, majd az igy kapott elegy pH-ját keverés közben 4^1 értékre állítjuk be 800 ml tömény sosavoldat adagolása utján. Ezt követően 278 liter etil-acetátot adagolunk, majd a keverést 2 órán át folytatjuk. Ezután a keverékhez mintegy 11 kg kovasavtartalmu szűrési segédanyagot adunk, majd az igy kapott szuszpenziót teljes mennyiségében átszivattyuzzuk egy 610 mm-es s'zürőjprésen. Ezután további 278 liter etil-acetáttal a szűrőlepényt átmossuk, majd folytatjuk az extrahálást a szűrőlepényen való átszivattyuzas irányának négyszeri megfordításával. Ezután a mosásra használt oldószer teljes mennyiségét eltávolítjuk a szürőprésből, majd hozzáadjuk az először kapott szürlethez. Az ekkor kapott kétfázisú elegyet ülepedni hagyjuk, majd a vizes fázist elválasztjuk. Az etil-acetátos fázist 38 liter ionmentes vízzel mossuk, majd a fázisokat szétválni hagyjuk és az etil-acetátos fázist vákuumban mintegy 38 liter térfogatra betöményitjük. 2. Laktonizálás /Az extraktumban jelenlévő IV képletü vegyület teljes mennyiségének a II képletü vegyületté való gyürüzárása céljából a következő azeotróp kezelést hajtjuk végre/. Az 1. lépésben kapott extraktumhoz hozzáadjuk egy további 1000 literes tenyészetből nyert etil-acetátos extraktumot, majd az elegy térfogatát vákuumdesztillálással közel 100 literre csökkentjük. Ekkor a koncentrátumhoz hozzáadunk közel I85 liter toluolt, majd az ekkor kapott elegyet vákuumban 118 literre betöményitjük. A két műveletet megismételjük, majd elegendő mennyiségű friss toluolt adagolunk ahhozj heg y a térfogatot 278 literre állítsuk be. Vákuum alkalmazása nélkül az elegyet ezután forrásba hozzuk, majd 106°0 fölötti hőmérsékleten 2 órán át visszafolyató hütő alkalmazásával forraljuk. Az ekkor kapott oldatot ezután vákuumban kis térfogatra bepároljuk, majd nagyméretű forgó vákuumbepárlóban olajos maradékká koncentráljuk. 3• Szilikagélen végzett krómatografálás A 2. lépésben kapott nyers anyagot más oldószerektől mentessé tesszük úgy, hogy hozzáadunk 7,6 liter metilén-kloridőt, majd újból olajjá pároljuk be. Ezt az olajat azután feloldjuk etil-acetát és metilén-klorid 30:70 térfogatarányu elegyében, majd a kapott oldatot 2,8 kg szilikagéllel szuszpenzióvá alakítjuk. 19
