182075. lajstromszámú szabadalom • Eljárás monacolin K előállítására
182.075 'j • Monascus paxii SANK 11172 120 4. Monascus ruber SANK I5I77 2400 5. Monascus ruber SAKK 18174 20000 Az eredmények mutatják, hogy a találmány szerinti mikroorganizmusok milyen jelentős mennyiségű Monacolin K-t képesek termelni. 6. példa A 2 - 5« példákban leirt módszer szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy az alkalmazott mikroorganizmus Monascus anka SAKK 10171, a tenyésztés 96., 168., 216 és 288. órájában vettünk mintát. A gátlás aktivitása - ugyanazzal a módszerrel mérve, mint a 2 - 5. példákban - sorra a következő volt: 110, 100, 30 és 80 egység/ml. 7-11. példa 300 liter folyékony tápközeget? amelynek pH-értéke 5>5 sterilezés előtt, és 5 vegyes % glükózt, 0,5 vegyes % kukoricalekvárt, 2 vegyes % peptont /Kyokuto/ és 0,5 vegyes % ammónium-kloridot tartalmaz, egy 600 literes fermentorba töltünk. A 2. táblázatban felsorolt törzsek közül eggyel beoltjuk, és 120 óra hosszat tenyésztjük. Ezt az eljárást ismételjük külön-külön valamennyi törzzsel. Tenyésztés után minden tápközeget leszűrünk szürőprésen, szürletet és a 2. táblázatban megadott mennyiségű biomasszát nyerünk. A szürlet pH-ját 6 n sósavval 4,0 értékre állítjuk be, majd 400 liter etil-acetáttal extraháljuk. Az extraktumot, melynek mennyisége mintegy 400 liter, csökkentett nyomáson bepároljuk, és vizmentes nátrium-szulfát fölött száritjuk. Az igy besűrített extraktumokat még tovább bepároljuk, mig olajos termékeket nyerünk, melyeknek mennyis égé a 2. táblázat IV. oszlopában található. Ezalatt a biomasszát, melynek 2-3-szor nagyobb az aktivitása, mint a megfelelő szürletnek, kétszer extraháljuk, mindkét alkalommal 100 liter 80 térf%-os vizes metanollal. Az extraktumot besüritjük, és vizmentes nátrium-szulfát felett száritjukj majd bepároljuk, mig olajos terméket nyerünk, melynek mennyiségét a 2. táblázat V. oszlopa mutatja. A szürlet és az annak megfelelő biomassza extraktumokat összesítjük, és adszorbeáltatjuk egy szilikagélt tartalmazó oszlopon /3 kg Wakogel C-200, benzollal kezelve/, eluáljuk sorban 10 liter benzollal és 180 liter 4:1 térfogatarányu metilén-klorid - etil-acetát - eleggyel. Az aktiv frakciókat bepároljuk, mig olajos terméket nyerünk, melynek mennyiségét a 2. táblázat "1. frakció" címszó alatt tartalmazza. Ezt az olajat adszorbeáltatjuk egy 340-450 g szilikagélt tartalmazóoszlopon /Wakogel C-200, előzőleg hexánnal kezelve/, a szilikagél mennyisége: 1 g szilikagél/65 mg olaj. Majd eluáljuk sorban 1,5-2 liter hexánnal, 23-30 liter 9:1 térfogatarányu hexán-aceton-eleggyel és 23-30 liter 4:1 térfogatarányu hexán-aceton-eleggyel. 8
