182067. lajstromszámú szabadalom • Eljárás LH-RH és LH-RH analógok előállítására
182.067 3 {; /10 mmól/ -Glu-IIis-OII és 2,3 g nátrium-hidrogén-karbonát 20 ml vizáéi készített oldatához szobahőmérsékleten, keverés közben, lassan hozzácsepegtetjük 2,1 ^ /10 %-os felesleg p-toluol-szulfoklorid körülbelül 10 ml dioxannal készített oldatát. A hozzáadás befejezése után az elegyet még 1 óra hosszat tovább keverjük. A reakcióelegyot azután éterrel kétszer klrázr zuk, a vizes fázist 2 n sósavoldattal 2 pH-értékig savanyítjuk, majd a képződött csapadékot leszivatással szűrjük, vízzel mos-" suk és f os zf or—pent oxid felett vákuumban megszór itjuk. Ily módon 2,2 g lklu-His/Tos/-OH terméket kapunk. ----------~---------— 3. példa LH-RH szintézise -Glu-His-OH felhasználásával, az I. táblázat szerinti különböző kapcsolási módszerekkel. ■NHp-ditozilát ^készített olás 640.mg H-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly 150 mg -ölu-His-0H.H?0 3 ml dimetil-acetárniddal datához 0,065 ml N-etTl-morfolin és 68 m^ HOBt /illetőleg 81 yet adjuk. Az elegyet :lohexll-karb odiImidet. amg_H00bt, 9? mg HONB* 57. mg HONSu/ ele 0 °C hőmérsékletre hűtjük, 110 mg dicii dunk hozzá, 1 óra hosszat 0 °o hőmérsékleten, majd éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. Másnap 0,1 ml hidrazin-hidrátot adunk az elegyhez, szobahőmérsékleten 2 óra hosszat keverjük, majd leszivatással szűrjük. A szürletet 30 ml n-butanol es 30 ml vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megoszlatjuk. Az H-butanolos fázist elkülönítjük, nagyvákuumban bepároljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük. A kapott csapadékot leszivatással leszűrjük és megszór itjuk, majd hig ecetsavban oldjuk és körülbelül 10 ml acetat-alakban levő Dowex 1x2 gyantán kromatografáljuk. Vizzel eluálunk és az eluátumot fagyasztva szárítjuk. Ily módon 500-600 mg terméket kapunk, amelyet további tisztítás céljából megoszlatásos krómatográfiának vetünk alá egy hidroxi-propilezett, térhálósított dextrán-gélen, a 24 38 350 sz. német szövetségi köztársaságbeli szabadalmi közzétételi irat 1. e/ példájában leirt eljárás szerint. így végülis 25O-3OO mg tiszta LH-RH terméket kapunk. 4-. példa LH-RH szintézise .'-Glu-His/Tos/-OH felhasználásával, az^ Î. táblázat szerinti különböző kapcsolási módszerekkel 640 mg H-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NHp-ditozilát és 210 mg tGlu-His/Tos/-OH 3 ml dümetil-acetáttal^készitet t oldatához 0,065 ml N-etil-morfolin és 81 mg HOObt /illetőleg 57 mg HONSu/ elegyét adjuk. Az elegyet 0 °G hőmérsékletre hütjük, 110 mg diciklohexil-karbodiimidet adunk hogzá, majd az elegyet 0 °G hőmérsékleten 1 óra hosszat és ezt követően szobahőmérsékleten éjjelen át keverjük. A reakcióelegy további feldolgozása a 3. példában leírthoz hasonló módon történik. így 275 mg /illetőleg 250 mg/ LH-RH terméket kapunk.--------------------—---------------5* példa LH-RH szintézise LGlu-His/Dnp/-OH felhasználásával, a találmány szerinti módszerrel 11 g /25 mmól/ ßlu-IIis/Dnp/-OH . 0,5 HP0 és 32 g /25 mmól/ H-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NHp . 2 Tos-OII 150 ml dimet il-ace tarai ddal készített oldatához 4f07 g HOObt /= 3-üi<3r-8
