182067. lajstromszámú szabadalom • Eljárás LH-RH és LH-RH analógok előállítására
182.067 oxi.-4-oxo-.5j,4— dihidro-1,2,5-benzotriazin/ hozzáadása és az elegy 0 °C hőmérsékletre- történő lehűtése után 5,25 ml N-etil-morfollnt és 5»5 6 dlclklohexll-karbodllmidet adunk. Az elegyet 0 °C hőmérsékleten 1 óra hosszat, majd szobahőmérsékleten éjjelen át keverjük, azután a képződött csapadékot leszivatássál kiszűrjük és kevés dimetil-acetamiddal mossuk. A mosófolyadékot egyesitjük a szürlettel, majd az elegyhez 2,5 ml 100 %-ofe hidrazin-hidrátot adunk és ezt az elegyet szobahőmérsékleten 4 óra hosszat keverjük. Fekete szinü oldatot kapunk, ebből 1250 ml etil-acetát hozzáadásával leválasztjuk a peptidett. A képző-' dött csapadékot leszivatással szűrjük, etil-acetátta majd 450 ml metanolban oldjuk és 1400 ml etil-acetát sa utján újból leválasztjuk a peptidet. Ezt a csapadékot leszivatással leszűrjük, majd 1000 ml n-butanolban oldjuk és az oldatot előbb 1000 ml telitett vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oX- dattal, ma^d 750 ml telitett vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oX- dattal kirazzuk. Az n-butanolos fázist elkülönítjük és nagyvákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékot etil-acetáttal eldörzsöljük, elkülönítjük és megszáritjuk. Ily módon körülbelül 25 g nyers LH-RH terméket kapunk. A 5* példában leírthoz hasonló módon történő tisztítás után a hozam 12-14 g tisztaamorf LH-RH. fWj _ -55° /c = 1, 1 %—os ecetsavban/. 6. példa LH-RH szintézise '-Glu-His/Dnp/-OH felhasználásával, az I. táblázatban megadott összehasonlítási kapcsolási módszerekkel. Az 5* példában leírtakkal azonos módon dolgozunk, azzal a különbséggel, hogy 4,07 g HOObt helyett 5»4 g HOBt-t, 45 g HONB-t, illetve 2,9 g HOHSu-t használunk. 7. példa rD-Ser/But/67LH-RH-/l-9/-nonapeptid-etilamid szintézise áGlu-His Dnp -OH felhasználásával, a találmány szerinti módszerrel 11 g /25 mmól/ Lölu-IIis/Dnp/-OH . 0,5 HpO és 26,6 g /25 mmól/ H-Trp-Ser-Tyr-D-Ser/BuV-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5.2nCl 150 mi dimetil-acetamiddal készített oldatához, 4,07 Ç HOOBt /= 5-hidroxi-4-oxo-5,/i~dihidro-l,2,5-benzotriazin/f hozzáadása és az elegy 0 °C hőmérsékletre való lehűtése után 5»25 ml H-etil-morfolint és 5,5 g diciklohexil-karbodiimidet adunk. Az elegyet 0 °C hőmérsékleten 1 óra hosszat keverjük^ majd a keverést éjjelen át szobahőmérsékleten folytatjuk. Masnap a képződött csapadékot leszivatással leszűrjük és 50 ml dimetil-acetamiddal mossuk. A mosófolyadékkal egyesitett szürlethez 2,5 ml 100%os hidrazin-hidrátot adunk. .Azl elegyet szobahőmérs éklet en 4 . Ó- ra hosszat keverjük, majd 1250 ml etil-acetát hozzáadásával kicsapjuk a peptidet. A csapadékot leszivatással szűrjük és etil-acetáttal alaposan mossuk. Ezután-450 ml metanolban oldjuk és ebből az oldatból 1400 etil-acetát hozzáadásával újból lecsapjuk a peptidet. Ezt a csapadékot 1000 ml n-butanolban oldjuk es egyszer 1000 ml telitett vizes nátrium-hidr ogén-karbonát-oldattal, majd 750 ml telitett vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal még egyszer kirázzuk. Az n-butanolos fázist bepárol-r mossuk. hozzáada-7
