182011. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antigén-származékok és az azokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1ÍÍ2.011 1* A sejt által közvetített immunitás in vivő potencirozáaat a késleltetett tlpusu túlérzékenység fokozása bovin szérumalbumln /BSA/ és juh erlthrociták /SRBC/ ellen tengerimalacokon Flrbright tengerimalacokat a 0. jelzésű napon komplett Freund-adjuvansban felvett 1 mg BSA-val vagy 1 mg "Ghosts” SRBC- vel /SRBCG/ 0,1 ml antlgén-adjuváns eleggyel a hátsó lábukba történő injekcióval Immunizáltunk. 3 héttel később a bőrreakci,ót 100/ug BOA, Illetve 100/Ug SRBCG 0,1 ml pufferolt fiziológiás sooldatban történő invrakután injektálásával kiváltottuk, es a 24 óra elteltével az erythémiás felületek nagyságából és a bőrvastagság növekedéséből számolt reakciótérfogattal határoztuk meg. A 24 óra múlva /késleltetett tipusu reakció/ megfigyelt antigénspecifikua reakciótérf ogatnövekedes a sejtek által koz-vetített immunitás mértéke. A BSA és SRBCG túl gyenge immunogén ahhoz, hogy önmagában vagy inkomplett Freund-adjuvánsban készített viz-olaj emulzióban /10 rész BSA-oldat, illetve SRBOG ' azuszpenzió 0,9 %-os nátriumklorid-oldatban 8,5 rész Bayol F /Serva, NSZK gyártmány/ és 1,5 rész Arlacel A :/ServaJTSZK gyártmány/ elegye/ késleltetett tlpusu reakciót indukáljon, a hatásos immunizáláshoz azokat komplett adjuvánsban, melyhez Mycobacterium sejteket is adtak /5 mg elölt és liofilizált M. butyrioum 10 ml Bayol F-arlacel A elegyben/ kell alkalmazni. A Mycobacterium-sejtek helyett a találmány szerinti antigénként BSA-t /I mg BSA, 60 /ug muramilpeptid állatonként/ vagy SRBCG-t /I mg SRBOG, 25 /lg muramilpeptid állatonként/ tartalmazó vegyületeket antigén-olaj-elegyként vagy karboximetilcellulózban /CMC/ szuszpendálva adagoltuk. A találmány szerinti vegyületek a Mycobacteriumok távollétében a fenti kísérletben késleltetett tlpusu reakciót indukáltak. A BSA és SRBOG elleni késleltetett tipusu reakció-aktivitás szignifikáns potencirozáaa úgy is elérhető volt, hogy az uj vegyületeket nem inkomplett Freund-adjuvánsban, hanem CMC- ben szuszpendálva alkalmaztuk. Ilyen esetben különösen hatásos» nak bizonyult az intramuszkuláris adagolás. Ilyen esetekben a CMC-elegyben levővel azonos mennyiségű szabad muramil-peptid lényegesen kevésbé volt aktiv, mint az uj hatóanyag. így megállapítható volt, hogy a találmány szerinti vegyületek klinikai gyakorlatban elfogadható adagolási körülmények között, azaz tetstbarát hordozóanyagokkal együtt adagolva sejt által közvetített immunitást indukált, még oldható proteinantigénnel szemben is. 2. A sejt által közvetített immunitás in vivo potencirozása BSA-val és SRBOG—vei szemben mutatott késleltetett tipusu túlérzékenység fokozása egereken MAG-himegereket a 0. napon fokozatosan emelt dózisokban nem muramil-peptidekkel konjugált antigénekkel /BSA-agaróz vagy SRBOG/ vagy. murami1-peptiddel konjugált antigénekkel /BSA-agaróz vagy SRBOG/ immunizáltunk. A BSA-agaróz készítményt 0,1 és 100 /ug közötti dózisban /mely az uj vegyületek esetén megfelel 0,029 és 6/ug közötti dózisnak/ 0,2 ml pufferolt fiziológiás sooldatban'szubkután adagoltuk. Az SRBOG—készítményeket 0,01 -* 3 mg dózisban adagoltuk /amely megfelel a muramil-peptidekkel alkotott uj vegyületek esetében 0,25-75 AB dózisnak/ 0,5 ml pufferolt fiziológiás sóoldatban intrapőritoneálisan, illetve 6
