182011. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antigén-származékok és az azokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
182.011-szukcinimidek éter oldalláncait /"spacer arma"/ tartalmazza, mely oldalláncúk N-hidroxiszukcinimlddel észterezettek. Az 1. példában leirt eljárás szerint előállított marhaazérumalbumin-3zármazék 120 mg-ját oldjuk 12,5 ml 7»3 pH értékű, 0,1 mólos f oszf átpuf ferban, 4 C°-on. 500 mg Affi-Gel 10-et összerázással azuszpendálunk az oldatban, majd 4 órán át rázzuk, 4 C°-on. A még jelenlévő aktiv észtercsoportokat 1 mólos etanolamin-hidroklorid és 0,1 mólos fossfátpufferoldat /pH 7,5/ e— legyével reagálhatjuk. Ezután a gélt egy oszlopra öntjük fel, melyet először 200 ml 0,1 mólos f oszf átpuf fér t tartalmazó 1 mólos nátriumklorid-oldattal /pH 7*3/, majd 20 ml fiziológiás sóoldattal mossuk. Az Affi-Gel 10-re kondenzált marha-szérumalbumin-muramll-peptid-vegyületek méghatározását meghatározott mennyiségű gélalikvot teljes hidrolizátumában jelenlévő marha-szérumaibumin-aminosavak mennyiségi analízisével végezzük. 1 ml megduzzadt Affi-Gel 10-hez átlagosan 9-10 marha-szérumalbumin-muramil-peptid-származék kapcsolódik. 5. példa Erlas birkavérből J.I. Dodge és munkatársai módszere szerint /T^roh. Biochem. Biophys. 100, /1965/, p. 114-18ÇT7 nyerünk birka-erithrocitamembránokat. 500 mg birka-erithrocita-membránhoz 50 ml 0,1 mól nátrlumhidrogénkarbonátot tartalmazó 0,1 mólos nátriumklorld-oldatban keverés közben 400 mg 2-acetamino-3-0-££j'-l-/D-l-karbamoil-3-azukcinimido-oxikarbonil-propil/-karbamoil-et 11J -karbamoll-metil3-2-dezoxl-D-glükózt adunk, és a reakcióelegyet 4 órán át keverjük szobahőmérsékleten. Ezután az erithrocltamembrán-konjugátumot egy órán át ülepítjük, 4 C°_ on, ultracentrifugában. 90 000 g értéknél. Az üledéket - mindenkori újra szuszçendalâssal és ultracentrifugálással - foszfáttal puffer olt nátriumklorid-oldattal háromszor, majd desztillált viszel egyszer mossuk. Az erithrocitamembrán-konjugátumot 100 ml desztillált vízben szuazpendáljuk, és fagyasztva szárítjuk. A birka-erithrocitákhoz kapcsolódó muramil-peptid mennyiségi meghatározását a Morgan-Elson reakcióval végezzük. 1 mg erithrooitamembránhoz 25/ug muramil-peptid kapcsolódik. 4. példa A Neisseria meningitidis-bői nyerhető C tipusu poliszacharid 100 mg-ját és 110 mg /0,2 mmól/ 2-acetamino-3-0-£/jj-l-/D-l-karbamoil-5-N-amlnoetil-karbamoil-propil/-karbamoil-etiÍ7- -karbamoil-meti33~2-dezoxi-D-glükóz-hidrokloridot 10 ml desztillált vízben oldunk, és a pH értéket hígított sósavval 5 értékre állítjuk. Az oldathoz keverés közben 19»2 mg l-etil-5-/3-dimetilamino-propil/-karbodiimid-hidrokloridot adunk. A reakcióelegyet egy órán át keverjük szobahőmérsékleten, a pH-értéket hígított nátriumhidroxi-oldat hozzáadásával 5 értéken tartjuk. Ezután 5 pH értékű 5 ml 2 mólos nátriumáéetát—pufferoldatot adunk hozzá, majd további 50 percen át keverjük. Végül a pH értéket nátriumhidroxi-oldat hozzáadásával 7 értékre állítjuk. Az oldatot szűréssel sterilizáljuk, 4 0°-on desztillált vízzel szemben dializáljuk, végül fagyasztva szárítjuk. 15
