181994. lajstromszámú szabadalom • Eljárás inaktivált peritonítisz vakcina előállítására
5 181994 6 lizálószereket tartalmazó vizes oldat, mint a Hank-féle kiegyensúlyozott sóoldat vagy más hasonló közeg lehet. A folyékony vivőanyagot kívánt esetben valamely lezárt steril edényben, például ampullában vagy üvegcsében tarthatjuk. A találmány további tárgyát oly vakcina képezi, amely immunitást fejleszt ki a macskafélék fajához tartozó állatokban a macskafélék fertőző hashártyagyulladását okozú vírus általi fertőzésekkel szemben ; ez a vakcina a fentebb ismertetett módon tenyésztett és inaktivált FIP- vlrust tartalmazza megfelelően kiszerelt alakban, a kívánt hatás elérésére elegendő vagy ennek többszörösét kitevő adagban. A vakcinálás céljaira elegendő hatásos adag körülbelül 104,0—108,0 TCID50/ml, előnyösen 105'0—io7,0 TCID50/ml lehet. A vírus-készítmény TCID50/ml értékét inaktiválás előtt határozzuk meg. A fent leírt módon inaktivált FIP-vírust előnyösen valamely oly segédanyaggal kombináljuk, amely elősegíti a vakcinálandó állat immún-reakcióját és ezzel növeli a vakcina hatásosságát. Ilyen segédanyagként például alumínium- vagy kalciumsók, mint foszfát vagy szilikát alkalmazhatók ; előnyösen alkalmazható erre a célra alumínium-hidroxid gél is. Alkalmazhatók továbbá az említett célra segédanyagként olyan olaj-víz-lanolin típusú elegyek is, amilyeneket például Freund ismertetett, vagy olyan típusú ásványi olaj-keverékeket, mint a Bayol F (Esso Ltd.) és Falba (Pfaltz and Bauer Inc. New York) kereskedelmi forgalomban levő készítmények. A vakcinák előállítása oly módon történhet, hogy az e célra vivőanyagként választott olajszerű segédanyagot az inaktivált vírus-készítmény egyenlő térfogatnyi mennyiségével homogenizáljuk. A vakcina elkészítése előtt a vírus-készítményt különféle módszerekkel koncentrálhatjuk is, például diaszűréssel, valamely fehérje-lecsapószer, például erre alkalmas szerves oldószer felhasználásával. Erre a célra jó eredménnyel alkalmazhatók a vízzel elegyedő rövidszénláncú alifás alkoholok és ketonok, különösen a metanol és az aceton. A vakcinát elkészítése után célszerűen egy steril edénybe töltjük le, amelyet azután lezárunk és 2—8 °C hőmérsékleten tárolunk a vakcina felhasználásáig. Eljárhatunk azonban oly módon is, hogy a vírus-szuszpenziót ampullákban vagy üvegcsékben megfagyasztjuk és cseppfolyós nitrogénben tároljuk. További lehetőségként a szuszpenzióhoz valamely stabilizálószert, például szorbitot és/vagy fehérje-hidrolizátumot, például a „Sol-u-pro” néven ismert készítményt adunk, majd az így stabilizált vírus-szuszpenziót liofilizáljuk. A találmány szerinti eljárással előállított vakcinát a macskafélék fajához tartozó állatoknak kívánt esetben intraperitoneális, szubkután vagy intramuszkuláris injekcióban, vagy pedig orális, nazális vagy intraokuláris úton adhatunk be. Az adott esetben alkalmazandó adagot vagy egyszerre, egyetlen adagban, vagy pedig időben elosztva, több rész-adagban adjuk be. Előnyös az olyan adagolás, amely szerint a FIP-vírus hatásos adagját két, egyenként 2 ml térfogatú rész-adagban adjuk be, legalább 21 napi időközzel. A találmány szerinti vakcina a legyengített FIP-vírus mellett tartalmazhat egyéb vakcinákat is ; erre a célra olyan antigén-anyagokat alkalmazhatunk, amelyeket más, a macskafélék sorába tartozó állatokon betegségeket előidéző mikroorganizmusokból, például a macskák fertőző bélgyulladását (panleucopenia) okozó parvovírusokból, macska-calicivírusból, macska rabies-vírusból, macska-retrovírusokból, például a macskafélék leukémiáját okozó vírusból vagy macska-herpes-vírusból ké- 5 szítettünk. Különösen előnyös az olyan kombinált vakcina, amely valamely steril edényben az inaktivált FIP-vírust tartalmazza nedves készítményként, mellette egy külön edényben egy vagy többféle más macska-vakcinát liofi- 10 lizált alakban, úgy, hogy a két készítményt felhasználás előtt egyesíteni lehessen. Tartalmazhat azonban az ilyen kombinált készítmény inaktivált FIP-vírust liofilizált alakban is az említett más vírus-vakcinákkal kombinálva ; az ilyen készítmény mellé egy steril vizet tartamazó 15 edényt is adunk, amellyel a liofilizált vakcina-kombináció felhasználás előtt folyékony állapotba hozható. Az ilyen, két edényt tartalmazó kombinált készítményeket egy dobozban vagy más tartányban helyezhetjük el, a használati utasítással együtt, amelyben leírjuk a liofili- 20 zált készítménynek a folyékony készítménnyel vagy steril vízzel történő egyesítését, közvetlenül felhasználható vakcina előállítása céljából. A találmány szerinti vakcina alkalmas arra, hogy a 25 macskafélék fajához tartozó állatokban immunitást fejlesszen ki a fertőző hashártyagyulladással (FIP) szemben ; a találmány körébe tartozik a leírt módon előállított vakcinák ilyen immunitás előidézése céljából történő alkalmazása is, amelynek lényege az, hogy az állatnak 30 a leírt módon elkészített vakcina hatásos adagját adjuk be intraperitoneális, szubkután vagy intramuszkuláris injekcióban, vagy pedig orális, nazális vagy intraokuláris úton. 35 A találmány további részleteit az alábbi példák szemléltetik közelebbről, megjegyzendő azonban, hogy a találmány köre semmilyen szempontból nincsen e konkrét példák tartalmára korlátozva. 40 1. példa Az inaktivált vírus előállítása 45 a) A vírus tenyésztése Egy fertőző hashártyagyulladásban (pyrexia és állapot-leromlás alapján felismerve) szenvedő 6 hónapos macskából vért veszünk a juguláris vénából. A vért 20 50 percig állni hagyjuk megalvadás céljából. A szérumot és a plazmát eltávolítjuk az alvadékból, majd az alvadékot erre alkalmas készülékben, például Stomacher-féle „Colworth” készülékben foszfáttal pufferezett sóoldattal 60 másodpercig trituráljuk. A szuszpenziót azután 55 1108 g-vel centrifugáljuk, majd a szupernatáns folyadékot dekantáljuk és ezzel oltjuk be diploid macska-embrió tüdő-sejtjeiből készített egybefolyó egyréteges, szérum-mentes „199” közegben készített sejt-kultúrát, amelyet azutári 37 °C hőmérsékleten körülbelül 7 napig in- 60 kubáltatunk. Az inkubálás után a sejteket megfagyasztjuk majd újra felengedjük. Az így kapott szétroncsolt fertőzött sejteket tartalmazó közeg egy alikvot-részét átoltjuk egy diploid macska-embrió tüdő-sejtjeiből „199” közegben készített friss egyréteges sejt-kultúrára 65 és ezt is inkubáltatjuk 37 C hőmérsékleten. 3
