181976. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 3'',4''-diacil-tilozin-származékok előállítására
7 181976 8 A fenti reakciónál az előbbi acilcsoport (R2) 4"-helyzetből átmegy 3 "-helyzetbe, és az R3 acilcsoport megy 4"-helyzetbe. A (VII) általános képletű vegyületnek a reakcióelegyből való elkülönítését és tisztítását az előbb a (IV) általános képletű vegyület kinyerésénél leírt eljáráshoz hasonlóan végezzük. A (VII) általános képletű vegyületből a védőcsoportot ammóniát tartalmazó metanollal vagy etanollal végzett kezeléssel távolítjuk el, ez a 4"-helyzetű védőcsoportot hasítja le. A reakció szobahőmérsékleten megy végbe, és szilikagélen végzett vékonyréteg-kromatográfiával a (VII) általános képletű vegyület eltűnésével tekinthető befejezettnek. Az így kapott reakcióelegyből az ammóniát és az alkoholt eldesztilláljuk, és az elegyet vizes metanollal melegítve eltávolítjuk a 2'-helyzetű acilcsoportot. A melegítést a metanol visszafolyató hűtő alatt történő forralásával végezzük. A reakció lefolyása szilikagélen végzett vékonyréteg-kromatográfiával követhető. Az (Id) általános képletű vegyületet a metanolnak a reakcióelegyből való eldesztillálásával nyerhetjük ki, majd tisztítjuk. [D] eljárás : Az olyan (I) általános képletű vegyületeket — ahol Rj jelentése rövidszénláncú alkanoilcsoport — azaz az (Id) általános képletű vegyületeket — ahol RJ, R2 és R3 jelentése az előbbiekkel azonos — úgy állítjuk elő, hogy (VI) általános képletű vegyületet melegítés közben alifás karbonsav-halogeniddel tercier szerves amin jelenlétében valamilyen iners szerves oldószerben (VIII) általános képletű vegyületté acilezünk — ahol Rj, R2, R3, Rj és R7 jelentése az előbbiekkel azonos. A (VIII) általános képletű vegyületet ammóniával reagáltatjuk metanolban vagy etanolban, majd metanolban melegítjük. A (VIII) általános képletű vegyület előállításánál a (VI) általános képletű vegyületet 3 "-helyzetben acilezzük az alifás karbonsav-halogeniddel. Az acilezés a (II) általános képletű vegyület 3"-helyzetű acilezésére az [A] eljárásnál leírt módszerrel is végezhető. Ezt követően a (VIII) általános képletű vegyületből a 2'- és a 4"-helyzetű védőcsoportok eltávolításával nyerjük az (Id) általános képletű vegyületet. Az eltávolítás a (VII) általános képletű vegyület védőcsoportjainak eltávolítására előbb leírt reakcióhoz hasonlóan végezhető. Az (Id) általános képletű vegyületet a metanol eltávolítása után kapott termékből az alább leírtak szerint nyerjük ki és tisztítjuk. A kívánt (I) általános képletű vegyület elkülönítése a makrolid antibiotikumok ismert elkülönítési és tisztítási műveleteivel végezhető, például koncentrálással, extrakcióval, mosással, átextrakcióval és átkristályosítással, valamint szilikagélen, aktivált alumínium-oxidon vagy valamilyen adszorbensen, például adszorbens gyantán végzett kromatográfiával. Az 1. táblázat a találmány szerinti vegyületek minimális inhibitor koncentrációit (MIC) mutatja mikroorganizmusokra. Az (I) általános képletű vegyület hatásos makrolid rezisztens mikroorganizmusok A csoportja ellen. A következő példák a találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek előállítását szemléltetik. A példákban megadott Rf-értékeket — ha külön nem jelezzük — az alábbi vékonyréteg-kromatográfiás körülmények között határoztuk meg. Hordozó: szilikagél 60 (Art. 5721, Merck). Futtatószer : A : n-hexán : aceton : benzol : etil-acetát : metanol (30: 10: 25 : 20: 10), B: benzol : aceton (3 : 1), C: benzol: aceton (4: 1). 5 10 15 20 25 30 35 1. táblázat MIC fig/ml vegyület Találmány szerinti vegyület Kontroll . 3"-helyzet Ac Ac Ac Ac Ac Pro Pro Pro Bu Iva H H teszt organizmus -^-helyzet Ac Pro Bu Iva Hex Pro Bu Iva Bu Ac H Bu Staph, aureus ATCC 6538P 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 0,8 0,8 Staph, aureus MS 353 1,6 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 6,1 1,6 1,6 3,1 Staph, aureus MS 353 A0* 12,5 25 12,5 6,3 12,5 25 12,5 6,3 12,5 6,3 100 50 Staph, aureus 0116* 12,5 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 100 25 Staph, aureus 0119* 50 12,5 12,5 6,3 12,5 12,5 12,5 6,3 12,5 25 100 50 Staph, aureus 0127* 100 25 25 12,5 25 25 25 12,5 25 100 100 100 Strept. pyogenes NY.5 0,2 0,2 0,2 0,2 0,4 0,2 0,2 0,4 0,2 0,2 0,2 0,2 Strept. pyogenes 1022* 6,3 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 6,3 100 12,5 * Erithromicinre, oleandromicinre, klinikailag izolált 16-tagú makrolidra rezisztens törzsek (makrolid rezisztens törzsek A csoportja), Ac=acetil; Pro-propionil ; Bu=butiril, Iva=izovaleril ; Hex— kaproil. 1. példa 3”-Acetil-4"-butiril-tiIozin 7 g kálium-karbonátot adunk 10 g tilozin 20 ml ecetsavanhidriddel készült oldatához, és 24 órán át 60 °C-on kevertetjük. A reakcióelegyet 200 ml vízbe öntjük, a pH-t 9,5-re állítjuk vizes ammóniaoldattal, és kétszer 60 extraháljuk 100 ml kloroformmal. Az extraktumot vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, és vákuumban szárazra párolva 10,2 g nyers 18,2',4", 4/"-tetraacetil-3,18-O-ciklo-tilozint kapunk. Vékonyréteg-kromatográfiás adatok : 65 RfA=0,77 ; RfB=0,20 ; Rfc=0,34. 4
