181973. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3''-helyzetben acilezett makrolid antibiotikumok előállítására
15 181973 16 I. táblázat Minimális inhibíciós koncentráció (MIC) ug/ml Anyag _ Vizsgált organizmus S^-acetil LM + +—A5 3”~propionii lm—a5 3"-butiril LM— A5 3j3"-diacetil LM—A5 9,3/’-diacetil LM—A5 If 4"-acetil-3"-butiril LM—A5 LM-AS LM- A3 Staph, aureus 6538P 1,6 0,8 0,8 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 3,1 Staph, aureus MS353 Staph, aureus MS353 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 C36 0,4 0,8 0,4 0,8 0,8 1,6 0,8 1,6 1,6 Strept. faecalis 1501 Staph, aureus 0,8 0,8 0,8 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 3,1 MS353A0* >100 >100 >100 >100 o © A 100 25 >100 >100 Staph, aureus 0116* 6,3 12,5 50 50 12,5 12,5 50 > 100 >100 Staph, aureus 0119* 100 >100 100 >100 100 >100 >100 >100 >100 Strept. pyogenes 1022* 0,4 0,4 0,8 1,6 0,4 0,8 6,3 >100 >100 * Eritromicinnel, oleandromicinnel, 16 tagú makrolidokkal szemben ellenálló klinikailag izolált törzsek (A-csoportú makrolid-rezisztens törzsek); inokulum 106/ml, táptalaj hígításos módszer. ** LM=Leukomicin. A találmányt a következő példákkal szemléltetjük. A példákban feltüntetett Rf-értékek mért értékek, me- 25 lyeket — ha másképp nem adjuk meg — az alábbi vékonyréteg-kromatográfiás körülmények között kaptunk; hordozó; Silica Gel 60 (Art. 5721, Merck Co.), futtatószerek: 30 A : n-hexán : benzol : aceton : etil-acetát : metanol (90:80:25:60:30); B: benzol: aceton (3: 1); C: benzol: aceton (5: 1). 1 1. példa 3,3"-Diacetil-leukomicin A5: 40 10 g 9-(diklór-acetil)-leukomicin A5 (RfA=0,55, RfB=0,ll) 250 ml vízmentes acetonnal készült oldatához hozzáadunk 11,5 ml vízmentes piridint majd 9,5 ml acetil-kloridot, és 50 °C-on 18 órát reagáltatjuk. A reakcióelegyet 250 ml jeges vízbe öntjük, a pH-t vizes am- 45 móniaoldattal 9,5-re állítjuk, és kétszer extraháljuk 250 ml kloroformmal. A kloroformos fázist vízmentes nátrium-szulfittal vízmentesítjük, és vákuumban szárazra párolva 9,82 g barnás színű port kapunk, amelynek fő komponense 3,2',3"-triacetil-9-(diklór-acetil)- 50 -leukomicin A5 (RfB=0,62; Rfc=0,35). Ezt a port feloldjuk 300 ml ammóniával telített metanolban, 1 órán át szobahőmérsékleten hagyjuk állni, és vákuumban szárazra párolva fő komponensként 3,2',3"-triacetil-leukomicin A5-öt (RfA=0,67 ; RrB^0,27 ; 55 Rfc=0,09) tartalmazó port kapunk. A port feloldjuk 300 ml metanolban, 20 órán át viszszafolyatás közben forraljuk, és vákuumban bepároljuk. A maradékot szilikagél oszlopon benzol: aceton (7:1) eleggyel eluálva kromatografáljuk. Az RfA=0,58-as föl- 60 tokát tartalmazó frakciókat egyesítjük, és vákuumban bepárolva 875 mg terméket kapunk. RfA=0,58; RfB=0,15. Tömegspektrum adatok (m/e): 855 (M+), 796 (M+- 59), 768 (M+-87). 65 A magmágneses rezonanciaspektrum adatai (CDC13, 100 MHz): 1,43 (3"-helyzet: CH3); 2,02 (3''-helyzet: acetoxi-); 2,29 (3-helyzet: acetoxi-); 9,79 (formil-) ppm. A fenti 9-(diklór-acetil)-leukomicin A5-öt az 50— 96 584 sz. japán szabadalmi leírásban közölt eljárással nyerjük ki. 2. példa 3 "-Acetil-leukomicin A3: 2 g 2'-acetil-leukomicin A3-t feloldunk 10 ml diklór-metánban, majd hozzáadunk 0,7 ml vízmentes piridint és 0,7 ml diklór-acetil-kloridot keverés és jeges hűtés közben, végül 1 órán át kevertetjük szobahőmérsékleten. A reakcióelegyhez 10 ml vizet adunk, majd 1 n sósavoldattal 2-re állítjuk a pH-t. A vizes réteg elválasztása után a diklórmetános réteget egymás után vízzel és telített nátrium-hidrogén-karbonát oldattal mossuk. Vízmentes nátrium-szulfáttal végzett szárítás után az oldatot vákuumban szárazra párolva 2'-acetil-9-(diklór-acetil)-leukomicin A3-t kapunk. Ezt feloldjuk 10 ml vízmentes acetonban, és utána hozzáadunk 2 ml vízmentes piridint. Keverés és hűtés közben hozzáadunk 1,4 ml acetil-kloridot, utána 20 órán át keverjük 50 °C-on. A reakcióelegyet 100 ml jeges vízbe öntjük, és az elegy pH-ját tömény vizes ammónium-hidroxid oldattal 9,5-re állítjuk, a kivált csapadékot kiszűrjük, vízzel mossuk, és megszárítjuk. A megszárított anyagot szilikagéllel töltött oszlopon benzol: aceton (18: 1) eleggyel eluálva kromatografáljuk. A fő komponenst tartalmazó frakciókat vákuumban szárazra párolva 460 mg 2',3"-diacetil-9-(diklór-acetil)-leukomicin A3-t kapunk. (RfB=0,62; Rfc=0,36). A fenti terméket 10 ml ammóniával telített metanolban feloldjuk, és 2 órán át állni hagyjuk, majd az oldószert csökkentett nyomáson eldesztilláljuk. A maradékot 20 ml metanolban feloldjuk, és 17 órán át visszafolyatás közben forraljuk. A reakcióelegyet vákuumban szárazra pároljuk, és a maradékot szilikagéllel töltött 8
