181731. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 6-[D-2-D-2-amino-3-N-metil-karbamoil-propion-amido)-2-p-hidroxi-fenil acetamido]-penicillánsav tisztítására
5 181731 6 (A)-(E) szennyeződések közül a (C) és (D) szennyeződések az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicülinnek az oszlopról való eluálása, sőt az oszlopnak vízzel való mosása után is adszorbeálódva maradnak az oszlopon. Amennyiben eluálószerként víznek és valamilyen vízzel elegyedő szerves oldószernek az elegyét alkalmazzuk, úgy az eluálószert előnyösen 0,3—5 óra"*, különösen 1-3 óra"1 térsebességgel vezetjük át az oszlopon. Ebben az esetben különösen előnyösen a vizes eleggyel történő eluálás előtt az oszlopot az (A) [vagy (E)] és (B) szennyeződések eltávolítása céljából vízzel mossuk. Ebben a mosási lépésben a vizet 0,1-5 óra"1 térsebességgel vezetjük át az oszlopon. A vízből és valamilyen vízzel elegyedő szerves oldószerből álló elegyként például a következők alkalmazhatók: víz és 1—4 szénatomos alkanol (például metanol, etanol), víz és 3-4 szénatomos alkanon (például aceton, metil-etil-keton), víz és 2-4 szénatomos dialkiléter (például dimetiléter, dietiléter), víz és 4 szénatomos ciklusos éter (például tetrahidrofurán, dioxán), víz és 3 szénatomos N,N-dialkil-alkanoil-amid (például dimetil-formamid, dimetil-acetamid), víz és dimetil-szulfoxid elegye. A találmány szerint különösen előnyösen víz és 1-3 szénatomos alkanol elegyét alkalmazzuk. 15 térf/térf% (különösen 2-8 térf./térf.%) vizes metanol és vizes etanol alkalmazásával nagy kitermeléssel, gyorsan eluálható az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicUlin az oszlopról. A vizes eleggyel való eluálás során a (C) és (D) szennyeződések gyakorlatilag nem deszorbeálódnak. Az elúciót bármely említett esetben, előnyösen 2-15 °C hőmérsékleten, különösen 4-6 °C hőmérsékleten hajtjuk végre. Amikor a sztirol-divinilbenzol kopolimer adszorpciós gyantán adszorbeálódott, nyers N’-metil-D- aszparaginil-amoxicillinnek vízzel vagy víznek és valamilyen vízzel elegyedő szerves oldószernek az elegyével történő eluálását végezzük, a nyers termékben levő (A) [vagy (E)j és (B) szennyeződések eluálódása az N’-metil-D- aszparaginil-amoxicillin deszorpciója előtt végbemegy. A sztirol-divinilbenzol kopolimer adszorpciós gyantán már adszorbeálódott (C) és (D) szennyeződések még többször ismételt vízzel vagy víznek és valamilyen vízzel elegyedő szerves oldószernek az elegyével végzett eluálással sem távolíthatók el. így tehát a kívánt vegyületet tartalmazó eluátumok illetve frakciók összegyűjtésével könnyen kapjuk az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin vizes oldatát, amely gyakorlatilag mentes a szennyeződésektől. A fentiek szerint kapott vizes oldatból az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin izolálását ismert módon végezzük. Az N’-metií-D-aszparaginil-amoxicillint például a vizes oldat koncentrálásával, fagyasztva koncentrálásával, fordított ozmózissal való koncentrálásával, és/vagy liofílizálásával nyerjük ki nagy tisztaságban. A találmány szerint az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin szintézise során keletkező illetve jelenlevő szennyeződések nem-poláros, makroporózus adszorpciós gyantán végzett egyszerű adszorpciós-elúciós eljárással nagy hatásfokkal távolíthatók el. Mivel a találmány szerinti eljárás az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin bomlása nélkül végrehajtható, a szennyeződésektől gyakorlatilag mentes terméket nagy kitermeléssel kapjuk. Az alábbi kísérletek és példák közelebbről bemutatják találmányunkat, anélkül azonban, hogy azt bármilyen szempontból korlátoznák. A kísérletekben és a példákban a nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárást a következő feltételek mellett végezzük: (A) oszlop- rozsdamentes acél oszlop (150 mm x 4 mm) töltet- 5 pm szemcseméretű szilikagélhez kémiailag kötött oktadecil-triklór-szilán mozgó fázis- metanol/pH 5,5 foszfát-puffer (12,5/87/5 térf./térf.%) áramlási sebesség- 0,5 ml/perc (B) A nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárást az (A) alatt leírt körülmények között hajtjuk végre, azzal az eltéréssel, hogy mozgó fázisként metanol/pH 5,5 foszfát-puffer 2,5/97,5 térf./térf.% arányú elegyét alkalmazzuk. A (B) szennyeződés, azaz a penicillsav kémiai szerkezete az (1) képletnek felel meg. A (C) szennyeződés, azaz a penicillsav és az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin kondenzációs termékének kémiai szerkezete az analitikai eredmények, mint az IR-spektrum, az UV-spektrum, az NMR-spektrum és az elemanalízis alapján a (2) képletnek felel meg. Kísérletek (A) Eljárás Az 1—(A) példa szerint előállított nyers N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin (tisztasága 79%) vizes oldatát a gyantával illetve az adszorbenssel töltött oszlopon vezetjük át. Az oszlopot ezután vízzel eluáljuk és az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillint tartalmazó frakciókat összegyűjtjük. A frakciókban található szennyeződéseket, valamint az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin tisztaságát és kitermelését nagy teljesítményű folyadékkromatográfiásán vizsgáljuk az (A) feltételek mellett. A gyanta illetve az adszorbensek (I) sztirol-divinilbenzol kopolimer (pórustérfogata 1,077 ml/g, fajlagos felülete 718m2/g, szemcsemérete 280-370 ß, gyártja Mitsubishi Chemical Industries Ltd., márkaneve Diaion HP-20). (II) erős anioncserélő gyanta (trimetil-ammónium-csoporttal /-N* (CH3)3/ helyettesített polisztirol, gyártja Rohm and Haas Co., márkaneve Amberlite CG-400]. (III) gyenge anioncserélő gyanta (divinilbenzol-akrildimetilaminoalkilamid kopolimer /CH2=CH— -CONH(CH2 )n -N(CH3 )2 /, gyártja Mitsubishi Chemical Industries Ltd., márkaneve Diaion WA—10], (IV) gyenge anioncserélő gyanta [dimetilamino-csoporttal /-N(CH3)2 helyettesített polisztirol, 3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
