181657. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ß-laktám-antibiotikumok és az ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
7 181657 8 1. In vitro kísérletek Az 5. és 9. példák vegyületeit, amelyek a találmány szerinti vegyületek tipikus képviselőinek tekinthetők, Müller—Hinton-tápoldatban 0,1% glükóz hozzáadása közben 100 /xg/ml koncentrációra hígítottuk. A tápoldat minden esetben 1 x 105—2 x 105 baktériumot tartalmazott milliliterenként. Ezt a kiindulási oldatot tartalmazó csövecskét minden esetben 24 órán át gőzzel sterilizáltuk és ezt követően meghatároztuk a zavarosodás fokát. Az átlátszóság jelenti a hatást. 100 /ug/ml-es adagolásban a következő baktéiiumkultúrák voltak átlátszóak (sp.=species): Klebsiella pneumoniae ; Enterobacter aerogenes sp. ; Providencia ; Serratia marcescens ; E. coli N ; Salmonella sp. ; Shigella sp. ; Proteus, indol-negatív és indol-pozitív ; Staphylococcus aureus 133; Diplococcus pneumoniae sp. ; Streptococcus pyogenes W. ; Enterococcus sp. ; Pseudomonas aeruginosa sp. 1. példa 2-(2-terc-butoxi-karboniI-imino-4-tiazolin-4-il)-glioxilsav etilészter 10 g 2-(2-amino-tiazol-4-il)-ecetsav etilésztert 30 g terc-butanolban 45 °C-on cseppenként 13,9 g di-terc-butil-pirokarbonáttal elegyítünk. A reakció befejeződése után (vékonyréteg kromatogram) az oldószert lepároljuk és a maradékot éterben felvesszük. Híg sósavas mosás, szárítás és bepárlás után petroléterrel kidörzsöljük (olvadáspont kromatográfia után: 78—79 °C). Ebből az anyagból 2,7 g-ot 2,1 g szelén-dioxiddal 50 ml dioxánban, amely 1 ml vizet tartalmaz, visszafolyató hűtő alatt melegítünk 16 órán át. Ezután Rotadest készülékkel bepároljuk, a maradékot vízzel és etil-acetáttal kezeljük, a szerves fázist Rotadesttel bepároljuk és a maradékot petroléterrel eldörzsöljük. Kitermelés: 1,1 g. Olvadáspont: 125 °C. NMR [100 MHz: 8 CCl4-ben (8,06) s; tiazolin]. 2. példa 2-(2-terc-butoxi-karboniI-imino-4-tiazolin-4-il)-glioxilsav Az 1. példa szerint előállított anyag 3,3 g-ját 15 ml etanolban oldjuk. Ehhez az oldathoz 15 ml vízben oldott 0,4 g nátrium-hidroxidot adunk és ezután az elegyet 20 °C-on 1 órán át kevertetjük. Ezután az elegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot vízben oldjuk, ezt a vizes oldatot etil-acetáttal mossuk, híg sósavval pH 1,5- re savanyítjuk, a kivált csapadékot leszívatjuk, vízzel mossuk és szárítjuk. Kitermelés: 1,4 g. Olvadáspont: körülbelül 150 °C (bomlás). Az anyag a vékonyrétegkromatogram alapján egységes. NMR (100 MHz: 8 d6—DMSO—CDCl3-ban) 8,24 (s, tiazolin 5—H) ; 1,44 [s, (CH3)3Cj. 3. példa 2-(2-terc-butoxi-karbonil-imino-4-tiazolin-4-il)-N-(imidazolidin-2-on-1 -il)-2-imino-ecetsav 0,7 g l-amino-2-oxo-imidazolidint melegen 5 ml etanolban oldunk. Ehhez az oldathoz 1,9 g, a 2. példa szerint előállított anyagot adunk és az elegyet egy éjszakán át 20 cC-on kevertetjük. A csapadékot leszívatjuk, etanollal mossuk és szárítjuk. Kitermelés: 1,3 g. Olvadáspont: körülbelül 198 °C (bomlás). NMR (100 MHz; 8 d7—DMF/CD3OD) 7,34 (s, tiazolin 5—H); 3,42 („s”; — CH2—CH2—); 1,52 [s; CCHj)3C]. Az anyag még körülbelül 0,4 molekvivalens etanolt tartalmaz. 4. példa 7-[2-(2-terc-butoxi-karbonil-imino-4-tiazolin-4-il)-N--(imidazolidin-2-on-l-il)-2-imino-acetamido]-3--acetoxi-metil-3-cefem-4-karbonsav A elegy A 3. példa szerint előállított anyagból 3 g-ot 40 ml diklór-metánban szuszpendálunk. Ezután 20 °C-on 1,2 ml trietil-amint adunk hozzá. 10 percen át kevertetjük, ezután —40 °C-ra hűtjük az oldatot és egymás után 0,05 ml 3-dimetil-amino-propanollal és 0,81 ml klór-hangyasavas etilészterrel elegyítjük. Még 20 percen át — 35 °C-on kevertetjük és 40 ml —35 °C-ra előhűtött acetont adunk hozzá. B elegy 3,0 g 7-amino-cefalosporánsavat 20 ml vízben szuszpendálunk és az éppen szükséges mennyiségű 1 n nátronlúg hozzáadásával oldatba visszük. 20 ml acetont adunk hozzá és —10 °C-ra hűtjük. A B elegyet keverés közben az A elegyhez adjuk és 20 °C szobahőmérsékleten 3 órán keresztül kevertetjük. Ezután sok vízzel hígítjuk, etil-acetátot adunk hozzá, kirázzuk és a kis mennyiségű oldhatatlan anyagot leszívatjuk. A vizes fázist elválasztjuk és etil-acetáttal mégegyszer extraháljuk. Az ismét elválasztott vizes fázisra azután friss etil-acetátot rétegezünk és keverés közben híg sósavval pH 1,5-re savanyítjuk. Az etil-acetátos fázist elválasztjuk, kevés vízzel mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk. Eközben egy csapadék válik ki (csapadék 1), amit leszívatunk (2,0 g). Ennek a csapadéknak a szűrletét vákuumban teljesen bepároljuk (maradék 1,5 g). A két anyagot diklór-metánban oldva, illetve szuszpendálva elválasztjuk és egy éjszakán át 20 °C-on állni hagyjuk. Az anyag eközben kikristályosodik. Összkitermelés : 2,0 g. Olvadáspont körülbelül 190 °C (bomlás). NMR (100 MHz 8 d6-DMSO(CD3OD-ben) 8,30 (s tiazolin 5-H) 5,83 (d J 5,0 Hz 7-H) 5,18 (d J 5,0 Hz 6-H) 5,08 és 4,80 (AB J 13 Hz 3- -CHrO) 3,68 és 3,55 (AB J 18 Hz 2-CH2) 3,30 („s” — CH2—OBJ—) 2,04 (s —CO— —CH3) 1,50 (s [CH3]3—C). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
