181535. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a spektinomicin új analógjainak előállítására
19 181535 20 se céljából. A 13C-minta elkülönítésekor 14 mg mennyiségű anyagot kapunk liofilizálás után. Ezt az anyagot víz és acélon elegyéből átkristályosítva a cím szerinti vegyöletet kapjuk, amelynek olvadáspontja 201—205 °C (bomlik). CMR (D20): 8 94,9,93,2, 73,6, 70,7, 67,2,64,6,62,7,60,8, 59,6,37,0, 31,9 és 31,4 p. p. m. A spektinomicin Rf értéke 0,5, míg a dm szerinti vegyületé 0,25. A cím szerinti vegyfilet már nyers formában is antibakteriális hatású merített korongos vizsgálatban. 4. példa 4',5'-Didehidro-spektinomidn-dihidroklorid előállítása (W reakdóvázlat) 93 mg N,N'-bisz-(benziloxi-karbonil).4',5'-didehidrospektinomicin, 70 mg 10% fémtartalmú szénhordozós palládiumkatalizátor, 30 ml izopropanol és 2 ml 0,1 n izopropanolos hidrogén-klorid-oldat keverékét 2,1 at nyomáson 1,5 órán át hidrogénezzük, majd további 30 mg katalizátort és 1,0 ml 0,1 n izopropanolos hidrogén-klorid-oldatot adagolunk és a hidrogénezést 2,5 órán át folytatjuk. Ezután a reakdóelegyet szüljük, majd a szűrletet bepároljuk, csapadékként 50 mg cím szerinti vegyületet kapva. Ez a csapadék hatásos Escherichia coli ellen és nem tartalmaz spektinomidnt vagy dihidrospektinomidnt a kloroform, metanol és ammónium-hidroxid 3:4:2 arányú elegyével, illetve 3 ammónium-hidroxidot tartalmazó acetonnal mint futtatószerrel végzett vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatok tanúsága szerint. Az utóbb említett oldószerrendszerrel végzett vizsgálatnál egy py-aktív foltot ad, amely megfelel az enantiomer 4',5'-dehidro-spektinomidn egy referendastandardjának. Az utóbbi a következőképpen jellemezhető: A tri-TMS-származék tömegspektruma [m/e]: 546 (M+ ), 531 (M—15), 492,426, 401, 361, 271 és 199. CMR (DjO, extemális tetrametil-szilán standard): 8 189,6, 179,3,102,8, 98,5, 72,6, 69,9, 67,0, 66,5, 62,6,61,5, 59,7, 32,1 és 22,0 p. p. m. 6. referenciapélda N,N'-bisz-(Benriloxi-karbonil)-6'-klór-spektinomicin előállítása (X reakdóvázlat) Szobahőmérsékleten 200 mg (0,32 millimól) N,N'-bisz-(benziloxi-karbonil)-6'-hidroxi-spektinomidn és 170 mg (0,65 millimól) trifenil-foszfin 10 ml szén-tetraklorid és 5 ml acetonitril elegyével készült oldatát 24 órán át keverjük, majd további 80 mg trifenil-foszfint adagolunk és a keverést 24 órán át folytatjuk. A reakdóelegyet ezután bepároljuk, majd a kapott olajat 50 ml kloroformban oldjuk. Az így kapott oldatot 15 ml 0,1 n sósavoldattal és 30 ml telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk. A vizes fázist kloroformmal extraháljuk, majd az egyesített szerves fázist nátrium-szulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. A nyers terméket ezután három 1000 mikronos, szilikagélből készült preparatlv vékonyréteg-kromatográfiás lemezen kromatografáljuk, futtatószerként metanol és kloroform 1:9 arányú elegyét használva. A szilikagélt meleg etil-acetáttal mossuk, majd a mosóoldatot szűrjük. A szűrletet bepároljuk, a maradékot kloroformban újraoldjuk, a kapott oldatot Celite márkanevű szűrőanyagon átszűrjük és a szűrletet bepároljuk, 87,9 mg (42%) mennyiségben a dm szerinti vegyületet kapva. CMB (D6-aceton): 192 (C-3' karbonilcsoport), 157, 138,0, 129.2, 128,4, 97,3, 92,1, 75,2, 74,7, 71,5, 67,3, 66,4, 65,7, 60.2, 60,9, 57,4,47,0, 41,6 és 31,5 p. p. m. Tömegspektrum a tri-TMS-származékra [m/e]: 850 (M* ), 835, 822, 814, 745 és 629. 7. referendapélda N,N'-bisz-(Benziloxi-karbonil)-6'-bróm-spektinomidn előállítása (Y reakdóvázlat) Szobahőmérsékleten 250 mg (0,406 millimól) N,N'-bisz(benziloxi-karbonil)-6'-hidroxi-spektinomidn, 270 mg (1,03 millimól) trifenil-foszfin és 1 g (3,02 millimól) szén-tetrabromid 4 ml acetonitrillel készült oldatát szobahőmérsékleten 2,5 napon át keverjük, majd bepároljuk és a maradékot két 1500 mikronos, szilikagélből készült preparatív vékonyréteg-kromatográfiás lemezen kromatografáljuk, futtatószerként etil-acetátot használva. A szilikagélt meleg acetonitrillel mossuk, majd a mosófolyadékot szűrjük. A szűrlet bepárlásakor 105 mg (37%) mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk. CMR (IVaceton): 192 (C-3' karbonilcsoport), 157, 138,1, 129,2, 128,4, 97,2, 92,0, 75,2, 74,5, 70,9, 67,3, 66,3, 65,6, 60,5, 57,5,42,5, 35,5 és 31,5 p. p. m. Tömegspektrum a tri-TMS-származékra [m/e]: 896; 894 (M+ ), 881, 879 (M—15), 814 (M—HBr), 745 és 629. 8. referendapélda N,N'-bisz-(Benziloxi-karbonil)-6'-hidroxi-spektinomidn előállítása (Z reakdóvázlat) 490 mg (0,64 millimól) N,N'-bisz-(benziloxi-karbonil)-3'-0-acetil-4'-(R)-acetoxi-6'-acetoxi-3'(5)-dihidro-spektinomicin acetonitrillel készült oldatát 1,5 g kálium-hidrogén-karbonáttal 48 órán át keverjük, majd a reakdóelegyet szűrjük és a szűrletet bepároljuk. A kapott 460 mg nyers terméket 3 ml tetrahidrofurán és 3 ml 4 n sósavoldat elegyében oldjuk, majd az így kapott reakdóelegyet feldolgozzuk úgy, hogy 200 ml kloroformmal hígítjuk, majd a szerves fázist telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és vízzel mossuk, nátrium-szulfát fölött szárítjuk és bepároljuk, 330 mg terméket kapva. A vékonyréteg-kromatográfiás és a CMR-vizsgálat szerint a termék legalább 85—90%-os tisztaságú. A terméket CMR-, tőmegspektrometriai és nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálattal a cím szerinti vegyületként azonosítottuk. 4. példa 6'-Klór-spektinomicin és dihidrokloridsója előállítása (AA reakdóvázlat) 43,4 mg (0,068 millimól) N,N'-bisz-(benziloxi-karbonil)-ó'-klór-spektinomiciu 5,5 ml izopropanollal készült oldatához hozzáadunk 42 mg 10% fémtartalmú bárium-szulfát hordozós patládiumkatalizátort. A reakcióedényt átöblítjük úgy, hogy többször vákuum alá helyezzük, az egyes kezelések között nitrogéngázzal öblítünk, majd a vákuumos kezeléseket megismételjük, közben-közben hidrogéngázzal végezve az öblítést. Ezt követően a reakdóelegyet atmoszféri5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
