181534. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A/16686 jelű antibiotikum előállítására
7 181534 8 V. táblázat Organizmus M.I.C. (Mg/ml) A/16686 antibiotikum S. aureus 54310 L 1096 0,62 S. aureus 54560/1L 1097 0,31 S. aureus 54635 L 1098 0,31 S. pyogenes L 33 0,04 S. pyogenes L 794 0,08 S. pyogenes L 800 0,04 S. pyogenes L 801 0,16 S. pyogenes L 802 0,08 S. pyogenes L 803 0,08 S. pyogenes L 804 0,62 S. pyogenes L 805 0,08 S. pneumoniae L 1055 0,04 S. pneumoniae L 1102 0,04 S. pneumoniae L 1174 0,08 S. faecalis L 768 0,31 S. faecalis L 876 0,31 S. faecalis L 922 0,31 S. faecalis L 949 0,31 S. faecalis L 965 0,31 S. faecalis L 1139 0,62 S. foecium L 763 0,16 Azt találtuk továbbá, hogy az A/16686 antibiotikum nagy mértékű aktivitást mutat in vivo is különböző patogén organizmusok ellen. Az A/16686 antibiotikum hatásossága jól látható a VI. táblázat adataiból, amely az EDS0 értékeket adja meg egerek esetében három különböző mikroorganizmus ellen. VI. táblázat ED,o mg/kg s.c. S. aureusc Tour S. pyogenes C203ISM S. pneumoniae Felton UC 41 A/16686 24,6 0,09 0,2 Azt találtuk, hogy az A/16686 antibiotikum viszonylag alacsony szintű toxiritást mutat kísérleti állatoknál. így az LD,0 érték például egereknél intraperitoneális beadás esetében körülbelül 500—750 mg/kg nagyságú. Az A/16686 antibiotikumot baktériumellenes szerek hatóanyagaként használhatjuk. Az A/16686 antibiotikumot gyógyszerkészítmények alakjában ipari méretekben állíthatjuk elő. Ezeket a gyógyszerkészítményeket, amelyek orális, topikális vagy parenterális beadásra alkalmasak, a gyógyszergyártásnál szokásosan alkalmazott és a szakember által jól ismert módon készíthetjük el. E készítmények előállítása például a Remington’s Pharmaceutical Sciences IS"1 Ed., 1975 Mack Publishing Co. Easton, Pennsylvania, irodalmi helyen van leírva. Ezek a készítmények tabletták, kapszulák, porok, kenőcsök, folyékony oldatok, befecskendezhető oldatok és hasonlók lehetnek. Az egységadag 0,5—99%, előnyösen 5— 80%, hatóanyagot tartalmazhat. A napi adag különböző tényezők figyelembe vételével állapítható meg és függ a testsúlytól, a fertőző organizmustól, a fertőzés mértékétől, továbbá a beadás időtartamától és módjától. A találmány szerinti eljárást a következőkben kiviteli példákon is bemutatjuk. 1. példa Az Actinoplanes sp. ATCC 33 076 törzs fermentálása Actinoplanes sp. ATCC 33 076 kultúrát előtenyésztünk oly módon, hogy a törzset rázóedényben a következő összetételű közegben hagyjuk fejlődni: húskivonat 3 g/1 élesztőkivonat 5 g/1 tripton 5 g/1 oldható keményítő -24 gA glükóz IgA CaC03 4gA csapvíz 1 liter A lombikokat körülbelül 96 óra hosszat rázzuk 28— 30 C°-on és utána az előtenyészeteket (1 liter) a széles szájú fermentorok beoltására használjuk, amelyek mindegyike 10 liter következő összetételű tápközeget tartalmaz: húskivonat 40 g pepton 40 g élesztőkivonat 10 g nátriumklorid 25 g szójababliszt 100 g glükóz 250 g CaC03 50 g csapvíz 10 liter A fermentációs anyagokat keverés közben 28—30 C°-on levegőigényes körülmények között inkubáljuk. Időközönként mikrobiológiailag megvizsgáljuk az antibiotikus hatást agar-diffúziós módszerrel, kísérleti organizmusként Sarcina lutea-t alkalmazunk. A maximális aktivitást 72—120 órás fermentáció után érjük el. 2. példa Az A/16686 antibiotikum kinyerése Teljes fermentációs táptalajt készítünk (170 liter) az 1. példában leírt módon, 10 C-ra lehűtjük a táptalajt és a pH-t 18%-os HCl-oldattal 3,5-re állítjuk. A keletkező savas táptalajt szűrőn (Clarcel Flow-Ma) szűrjük és a micella-pogácsát vízzel mossuk. Ezután a szűrt táptalajt és a micéliumot a továbbiakban külön-külön dolgozzuk fel. a) 30 ml metanolt használunk a micéliummassza extrahálására, amelyet szűrés után ismét extrahálunk metanol/vízeleggyel (30 liter metanol és 5 liter víz). A kimerült micéliumot eldobjuk és a két metanolos kivonatot 40 C* alatti hőmérsékleten vákuumban betöményítjük, így 6 liter vizes koncentrátumot kapunk. Ezt a vizes koncentrátumot 10—10 liter n-butanollal háromszor extraháljuk, a kivonatokat egyesítjük és vákuumban kis térfogatra betöményítjük. Ezt a koncentrátumot petroléterhez adjuk és a keletkező csapadékot dekantálással elkülönítjük, majd további petroléterhez adjuk. A kivált csapadékot szűréssel elkülönítjük és vákuumban szobahőmérsékleten szárítjuk. Ily módon 80 g A/16686 antibiotikumot kapunk nyers anyag alakjában, amelynek az M. I. C. értéke S. pneumoniae UC 41 ellen 0,1 pg/ml. b) A szűrt (165 liter) táptalajt mossuk, 10 C°-ra hütjük és a pH-t tömény HCl-el (2,5 liter) 3,5-re állítjuk be. A kapott oldatot 80 liter n-butanollal extraháljuk és a szerves kivona-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 «55 4
