181031. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ergozin előállítására
3 181031 4 tint/ergokrisztinint termel. A Claviceps törzseken kívül egyéb gombák is termelnek ergozint. Ilyenek például a Mucor hiemalis, Rhizopus nigricans és a Geotrichum candidum [Japan. J. Microbiol. 14, 91 (1970)]. Az R. nigricans az ergozin/ergozinin mellett 5 agroklavint, a G. candidum az ergozin mellett (14 napos inkubáció után mintegy 61%) agroklavint, elimoklavint és lizergsavat [Pak. J. Biochem. 3, 8 (1970); C. A. 76, 2514p, (1972)] termel. Az alkaloidok nem válnak ki a tápoldatban, hanem a micé- 10 liumban maradnak, a bevitt tápoldatra vonatkoztatva az összes alkaloid mennyiség csak 5-6 Mg/ml. A nevezett eljárások nagy hátránya egyrészt az ergozin csekély mennyisége, másrészt az igen közelálló szerkezetű peptid-típusú alkaloidok egymás mel- 15 letti jelenléte, amely alkaloidokat így először komplikált módon egymástól el kell választani. A találmány célkitűzése abban áll, hogy egy eljárást fejlesszen ki ergozin kinyerésére, amelynél a rokon szerkezetű peptid-típusú alkaloidok költséges el- 20 választása nem szükséges. A találmány alapját az a feladat képezi, hogy olyan törzseket izoláljunk, amelyek: 1. képesek szaprofita módon olyan ergozint 25 képezni, ami csaknem mentes a mellékalkaloidoktól, és 2. kitűnnek stabilitásukkal és jó fermentációs sajátságaikkal. 30 Halle térségében (NDK), rozson növekvő, ergotamint képező szkleróciumokból izolált Claviceps purpurea (Fr) Túl., vad törzsekből (PUR 13, PUR 50) indultunk ki. Ezek a vad törzsek szaprofita kultúrában mentesek voltak az alkaloidoktól. Ezen törzsek UV-fénnyel történő mutálásával olyan törzseket lehetett izolálni, amelyek szaprofita körülmények között mentesek voltak az alkaloidoktól, de jelentős morfológiai változásokat (plektenchymatikus szerkezetek) mutattak, Néhány törzsnél a kiindulási formával összehasonlítva jelentősen megnövekedett az aromás vegyületek bioszintézise enzimjeinek aktivitása. A morfológiailag megváltoztatott szelektánsok második mutációja után mintegy 2000 vonalból egy olyan törzset lehetett izolálni, amely képes volt ergozint termelni. Ezen munkák során lehetséges volt, hogy egy szaprofita körülmények között alkaloidmentes gomba anyagot produktív törzzsé alakítsunk át, és az alkaloid spektrumot - a szkleróciumra vonatkoztatva - átállítsuk. Az izolált törzs Claviceps purpurea (Fr) Túl. MUT 168 megjelöléssel rendelkezik, és a Zentralinsitut für Mikrobiologie und experimentelle Therapie der Akademie der Wissenschaften der DDR, Jéna, az IMET PA 134 számon helyezte letétbe. A törzs mindenekelőtt abban tűnik ki, hogy az ergozint és annak izomerjét, az ergozinint 90%-ig terjedő mennyiségben termeli 10% könnyen leválasztható klavin-keverék mellett. Az új törzs a következő makroszkopikus és mikroszkopikus sajátságokkal rendelkezik: (A Claviceps purpurea MUT 168 törzset az 1. táblázatban megadott agar-közegeken tenyésztettük.) 1. táblázat Agáron végzett kultivációra használt tápközegek Komponensek M10 NL846 NL829 NL784 Sörcefré (nem komlózott előcefré 15%) 330 ml Élesztő kivonat 3 g 0,5 g 3,0 g Szacharóz 100,0 g 100,0 g Glükóz 50,0 g Ammónium-citrát 15,0 g L-Aszparagin 10,0 g Neo-pepton 3,0 g Ca(N03)2 1,0 g 1,0 g kh2 po4 0,25 g 0,25 g 0,5 g FeS04 * 7H20 10 mg 20 mg 20 mg ZnS04 • 7H20 4,4 mg 20 mg 17,6 mg MgS04 • 7H20 0,3 g 0,25 g 0,3 g KC1 0,2 g Agar-agar 25-30 g 30 g 25-30 g 25-30 g Viz 1000,0-ig 1000,0-ig 1000,0-ig 1000,0-ig P« 5,5 5,6-5,8 5,4-5,6 5,5 Sterilizálás 30 perc 30 perc 30 perc 30 perc 110 °C-on 110 °C-on 110 °C-on 110 °C-on Mikroszkopikus kinézet: nak, melyek átlagos vastagsága 4-5 p. Az elágazásoknál 7-8 p-t mértünk. Konídiumokat nem figyel- Az 1. táblázatban megnevezett agar-közegeken a tünk meg,, a szokásos sporulációs közegeken azonkolóniák többé-kevésbé elágazó micéliumokból áll- 65 ban (például az M 10 közegen) a micélium részben 2
