181013. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új enkefalin analógok előállítására
17 181013 8. példa L-Tirozil-D-norleucil-glicil-L-fenilalanil-L-alfa-aminopentán-szulfonsav előállítása 1. lépés: terc-butiloxikarbonil-L-tirozil-D-norleucil-glicin-pentaklórfenilészter 6,8 g (15 mmól) védett tripeptidből (7. példa, 3. lépés) aktív észtert készítünk a 2. példa 5. lépésében leírt módon, azzal az eltéréssel, hogy a végterméket éteres eldörzsöléssel tisztítjuk. 10,3 g (98%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 175-177 °C; Rf12 0,5-0,6. 2. lépés: terc-butiloxikarbonil-L-tirozil-D-norleucil-glicil-L-fenilalanil-L-alfa-amino-pentán-szulfonsav-N-metil-morfolin-só 2,2 g (3,15 mmól) védett tripeptid aktív észtert (1. lépés) és 0,95 g (3 mmól) dipeptidet (2. példa, 4. lépés) a 2. példa 6. lépésében leírt módon kondenzálva 1,63 g (64%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 134-135 °C; Rfs 0,6-0,7; [a]20 = —18,8° (c = 1, dimetilformamidban). 3. lépés: L-tirozil-D-norleucil-glicil-L-fenilalanil-L-alf a-amino-pentán-szulf onsav 1.5 g (1,75 mmól) védett pentapeptid-sót (2. lépés) a 2. példa 7. lépésében leírt módon alakítunk tovább, azzal az eltéréssel, hogy a csapadékot 10 ml vízzel is mossuk. 0,91 g (80%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 198-200 °C; R* 0,33-0,43; [a]20 = —12,1° (c = 1, metanolban). 9. példa L-Tirozil-D-norleucil-glicil-L-fenilalanil--L-alfa-amino-gamma-metil-bután-szulfonsav előállítása 1. lépés: DL alfa-amino-gamma-metil-bután-szulfonsav 63.5 ml (510 mmól) izovaleraldehidből kiindulva és a 2. példa 1. lépésében leírt módon eljárva 40 g (47,7%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 142-144 °C. 2. lépés: benziloxikarbonil-L-fenilalanil-DL-alfa--amino-gamma-metil-bután-szulfonsav 33 g (110 mmól) benziloxikarbonil-L-fenilalanint és 12,2 ml (110 mmól) N-metil-morfolint feloldunk 200 ml dimetilformamidban. Az oldatot -10°C-ra hűtjük és ezen a hőmérsékleten keverés közben hozzáadunk 14,5 ml (110 mmól) klórhangyasav-izobutilésztert, majd 10 perc után 16,7 g (100 mmól) D L - al f a -amino-gamma-me til-bután-szulfonsavat ( 1. lépés) és 14 ml (100 mmól) trietilamint 200 ml dimetilformamidban oldva. A re akció ele gyet egy órán át — 10°C-on és négy órán át 0°C-on kevertetjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 500 ml vízben feloldjuk és háromszor 100 ml dietiléterrel kirázzuk. A vizes fázist 2-es pH-ra savanyítjuk tömény vizes sósav-oldattal és háromszor 100 ml vízzel telített n-butanollal kirázzuk. Az n-butanolos oldatokat egyesítjük, kétszer 50 ml butanollal telített vízzel mossuk, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. 27 g (85%) cím szerinti terméket kapunk. R2 0,20-0,30. 3. lépés: L-fenilalanil-D-alfa-amino-gamma--metil-bután-szulfonsav A 2. lépésben kapott védett dipeptidet (27 g, 85,87 mmól) feloldjuk 600 ml metanol és 60 ml 25%-os vizes ammónia elegyében, és csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A reakció végén a katalizátort kiszüljük, és 50%-os vizes metanollal mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékot csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot tömény kénsav mellett szárítjuk vákuum-exszikkátorban, majd 50 ml 60—80°C-os vízzel elkeverjük. A kristály-szuszpenziót éjszakán át 5 °C körüli hőmérsékleten állni hagyjuk, majd szüljük és háromszor 5 ml hideg vízzel mossuk. A szűrletet és a mosóvizet egyesítjük, és félretesszük (lásd 4. lépés). A kristályos anyagot vákuum-exszikkátorban szárítjuk. 10,8 g (34,35 mmól, 80%) cím szerinti anyagot kapunk. Op.: 254-256 °C; [a]2° = +127,0° (c= 1, In nátrium-hidroxidban), 4. lépés: L-fenilalanil-L-alfa-amino-gamma-me til-bután-szulfonsav A. 3. lépésben kapott kristályosítási anyalúgot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk és tetrahidrofuránnal elkeverjük, majd szűrjük, tetrahidrofuránnal mossuk és szárítjuk. 10,1 g (32,2 mmól, 75%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 226-228 °C; [a]20 = -77,85° (c= 1, In nátrium-hidroxidban). 5. lépés: L-Tirozil-D-norleucil-glicil-L-fenilalanil-L-alfa-amino-gamma-me til-bután-szulfonsav 1,08 g (2,4 mmól) terc-butiloxikarbonil-L-tirozil-D-norleucil-glicint (7. példa, 3. lépés) és 0,64 g (2 mmól) L-fenilalanil-L-alfa-amino-gamma-metil-bután-szulfonsavat (9. példa, 4. lépés) az 1. példa 7. lépésében leírt módon kondenzálunk. A reakcióelegy bepárlása után a maradékot 30 ml vízben oldjuk, kirázzuk háromszor 10 ml etilacetáttal, majd az egyesített etilacetátos oldatokat kétszer 5 ml vízzel. A vizes oldatokat egyesítjük, 1 n kénsavval 2-es pH-ra savanyítjuk és háromszor 10 ml 2 : 1 arányú etilacetát-n-butanol eleggyel kirázzuk. Az etilacetát-n-butanol-oldatokat egyesítjük, kétszer 5 ml butanollal telített 18 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
