181013. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új enkefalin analógok előállítására
15 181013 16 Op.: 193-195 °C; [a]20 = +15,6° (c = 1, In nátrium-hidroxidban), R3 0,35-0,40. 6. példa 5 L-Tirozil-D-metionil-glicil-L-fenilalanil-L-alfa-amino-pentán-szulfonsav előállítása 1. lépés: 10 terc-butiloxikarbonil-L-tirozil-D-metionil-glicin-pentaklórfenilészter 7.05 g (15 mmól) védett tripeptidből (5. példa, 2. lépés) a 2. példa 5. lépésében leírt módon aktív15 észtert készítünk, azzal az eltéréssel, hogy a terméket diizopropiléteres eldörzsöléssel tisztítjuk. 8,66 g (80,4%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 175-176 °C; Rf12 0,25-0,35; [a]20 = +21,7° (c = 1, dimetilformamidban). 20 2. lépés: terc-butiloxikarbonil-L-tirozil-D-metionil-glicil-L-fenilalanil-L-alfa-amino-pentán-szulfonsav-N-metil- 25 -morfolin-só 2,26 g (3,15 mmól) védett tripeptid aktív észtert (1. íépés) és 0,95 g (3 mmól) dipeptidet (2. példa, 4. lépés) a 2. példa 6. lépésében leírt módon kon-50 denzálva 1,73 g (66,5%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 124-127 °C; Rs{ 0,35-0,45; [a]20 = -15° (c = 1, aimetilformamidban). 35 3. lépés: L-tirozil-D-metionil-glicil-L-fenilalanil-L-alfa-amino-pentán-szulfonsav 1.5 g (1,75 mmól) védett pentapeptid-sót (2.40 lépés) a 2. példa 7. lépésében leírt módon alakítunk tovább, azzal az eltéréssel, hogy a terméket kétszer 10 ml forró vízzel is mossuk. 0,78 g (66,7%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 200-201 °C; R* 0,5-0,6; R] 0,2-0,3; 45 [a]p° = -20° (c = 1, trifluorecetsavban). L-Tirozil-D-norleucil-glicil-L-fenilalanil--L-alfa-amino-pentán-foszfonsav 1. lépés: terc-butiloxikarbonil-D-norleucil- 55-glicin-benzilészter 11,57 g (50 mmól) terc-butiloxikarbonil-D-norleucint és 5,6 ml (50 mmól) N-metil-morfolint 50 ml dimetilformamidban oldunk. Az oldatot —10 °C-ra 60 hűtjük, és keverés közben hozzáadunk 6,6 ml (50 mmól) klórhangyasav-izobutilésztert. Tíz perc után a reakcióelegyet -20 °C-ra hűtjük, majd hozzáadjuk 18,6 g (55 mmól) glicin-benzilészter-p-toluol-szulfonát és 6,1 ml (55 mmól) N-metil-morfolin 80 ml di- 65 metilformamidban készített és -20 °C-ra lehűtött oldatát. A reakcióelegy keverését 10 percig -10 °C-on, 1 órán át 0 °C-on és éjszakán át szobahőmérsékleten folytatjuk. Ezt követően a reakcióelegyet szűrjük, és csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 300 ml etilacetátban és 100 ml vízben oldjuk. Az etilacetátos fázist rendre kétszer 60 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonáttal, kétszer 60 ml vízzel, kétszer 60 ml - jeges vízzel lehűtött - 1 n sósavvá és kétszer 60 ml vízzel mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás és csontszenes derítés után csökkentett nyomáson bepároljuk. A kristályos maradékot diizopropiléterrel eldörzsöljük, szűrjük, diizopropiléterrel mossuk és szárítjuk. 14,65 g (76,9%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 85-86 °C; Rf13 0,75-0,85; [a]20 = 4-12,2° (c = 1, dimetilformamidban). 2. lépés: terc-butiloxikarbonil-L-tirozil-D-norleucil-glicin-benzilészter 14,2 g (37,5 mmól) védett dipeptidészterből (1. lépés) és 21,85 g (41,25 mmól) terc-butiloxikarbonil-L-tirozin-pentaklórfenilészterből kiindulva, 4,2 és 4,6 ml N-metil-morfolin alkalmazásával védett tripeptid észtert készítünk az 5. példa 2. lépésében leírt módon. 15,44 g (76%) cím szerinti terméket kapunk. . Op.: 122 °C; Rf12 0,25-0,35; [a]p° = 4-6° (c = 1, dimetilformamidban). 3. lépés: terc-butiloxikarbonil-L-tirozil--D-norleucil-glicin 14,9 g (27,5 mmól) védett tripeptidésztert (2. lépés) 300 ml metanolban feloldunk, hozzáadunk 55 ml 1 n nátrium-hidroxidot, és 3 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezt követően az oldatból csökkentett nyomáson kidesztilláljuk a metanolt, a vizes oldatot háromszor 15 ml etilacetáttal kirázzuk, majd szilárd citromsavval pH = 3-ra savanyítjuk. A kivált anyagot kiszűrjük, vízzel mossuk és vákuum-exszikkátorban szárítjuk. 8,1 g (65%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 174-175 °C; R2 0,35-0,45; [a]20 = 4-2,0° (c = 1, dimetilformamidban). 4. lépés: L-tirozil-D-norleucil-glicil-L-fenilalanil--L-alfa-amino-pentán-foszforsav 1,08 g (2,4 mmól) terc-butiloxikarbonil-L-tirozil-D-norleucü-glicinből (3. lépés) és 0,63 g (2 mmól) L-fenilalanil-L-alfa-amino-pentán-foszfonsavból (1. példa, 4. lépés) kiindulva és az 1. példa 7. lépésében leírt módon eljárva 0,85 g (65%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 196—198 °C; [a]20 =+8° (c = 1, In nátrium-hidroxidban); R3 0,35-0,40. 8
