181013. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új enkefalin analógok előállítására
9 181013 10 5. lépés: terc-butiloxikarbonil-glicil-glicin--benzil-észter 14,2 g (42 mmól) glicin-benzilészter-p-toluolszulfonátot 100 ml dimetilformamidban oldunk, hozzáadunk 4,6 ml (42 mmól) N-metil-morfolint és 14,2 g (40 mmól) terc-butil-oxikarbonil-glicin-2,4,5-triklórfenilésztert, és éjszakán át keverjük szobahőmérsékleten. A reakcióelegyet bepároljuk, majd a maradékot 150 ml etilacetátban és 50 ml vízben oldjuk. Az etilacetátos fázist jeges vízzel hűtött 1 n sósavval (kétszer 30 ml) és vízzel mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. A maradékot 1 : 1 arányú diizopropiléter-petroléter eleggyel eldörzsöljük, szűrjük, az említett eleggyel mossuk és exszikkátorban szárítjuk. 11,0 g (82,2%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 83 °C; R‘4 0,1-0,2. 6. lépés: terc-butiloxikarbonil-L-tirozil--glicil-glicin 10,15 g (31,5 mmól) védett dipeptidésztert (5. lépés) 100 ml 11-15% sósavat tartalmazó etilacetátban oldunk. Fél óráig állni hagyjuk, majd csökkentett nyomáson bepároljuk, és a maradékot kálium-hidroxid mellett vákuum-exszikkátorban szárítjuk. Az így nyert terméket (7,8 g; Rf 0,1-0,2) 35 ml dimetilformamidban feloldjuk, hozzáadunk 3,4 ml (30,13 mmól) N-metil-morfolint és 15,1 g (30 mmól) terc-butiloxikarbonil-L-tirozin-pentaklórfenilésztert, és 16-20 órán át állni hagyjuk. Az első két órában 5 részletben 3,3 ml (30 mmól) N-metil-morfolint adunk a reakcióelegyhez. Az oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk, a maradékot 250 ml etilacetátban és 50 ml vízben oldjuk, az etilacetátos fázist kétszer 50 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonáttal, kétszer 50 ml vízzel, kétszer 50 ml — jeges vízzel lehűtött -In sósavval és ismét vízzel mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után és csontszenes derítés után csökkentett nyomáson bepároljuk. A párlási maradékot diizopropiléterrel eldörzsöljük, szüljük, diizopropiléterrel mossuk, és vákuum-exszikkátorban szárítjuk. Az így nyert védett tripeptid-észtert (R^0 0,65-0,75) 150 ml metanolban oldjuk, és csontszenes palládium katalizátor mellett hidrogénezzük. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, a metanolos oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk, és a maradékot dietiléter—diizopropiléter 1 : 1 arányú elegyével eldörzsöljük, majd szűrjük és vákuum-exszikkátorban szárítjuk. 8,35 g (70,3%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 92-94 °C; Rf3 0,2-0,3. 7. lépés: L- tirozil-glicil-glicil-L-fenilalanil-L-alfa-amino-pentán-foszfonsav 0,95 g (2,4 mmól) védett tripeptidet (6. lépés) és 0,27 ml (2,4 mmól) N-metil-morfolint feloldunk 5 ml dimetilformamidban és -10°C-on keverés közben hozzáadunk 0,31 ml (2,4 mmól) klórhangyasav-izobutilésztert, majd 10 perc után 0,63 g (2 mmól) szabad dipeptidnek (L-fenilalanil-L-alfa-amino-pentán-foszfonsav; 1. példa 4. lépés) és 0,56 ml (4 mmól) trietilaminnak 4 ml dimetilformamid és 0,5 ml víz elegyében készült oldatát. A reakcióelegyet —5 és —10 °C közötti hőmérsékleten keverjük 3—4 órán át, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 20 ml 5%-os vizes piridinben, és hozzáadunk 0,3 g (2,3 mmól) kálcium-klorid-hidrátot 5 ml vízben oldva. A keletkezett csapadékot szűrjük, ötször 5 ml vízzel mossuk, majd hozzáadunk 10 ml 1 n kénsavat és 30 ml etilacetátot. A rendszert alaposan elkeverjük, a kivált kálcium-szulfátot kiszűrjük és a fázisokat elválasztjuk. A vizes fázist kétszer 10 ml etilacetáttal mossuk, az etilacetátos oldatokat egyesítjük, kétszer 10 ml vízzel mossuk, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 10 ml trifluorecetsavban és 30 percig állni hagyjuk. Az oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk, a maradékról ledesztillálunk kétszer 10 ml ecetsavat, majd vákuum exszikkátorban szárítjuk kálium-hidroxid mellett. Ezt követően a terméket 5 ml vízzel eldörzsöljük, szűrjük, háromszor 3 ml vízzel mossuk és vákuum exszikkátorban szárítjuk káliumhidroxid mellett. 0,85 g (72%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 203-205 °C; [a]30 = -8° (c = 1, 1 n nátrium-hidroxidban); R3 0,30-0,35. 2 példa L-Tirozil-glicil-glicil-L-fenilalanil-L-alfa-amino-pentán-szulfonsav előállítása 1 lépés: DL-alfa-amíno-pentán-szulfonsav 52 g (500 mmól) nátrium-biszulfitot 250 ml meleg vízben feloldunk, hozzáadunk 53,6 ml (510 mmól) n-valeraldehidet, és a keletkezett narancsvörös reakcióelegyet gőzfürdőn keverjük, amíg elszíntelenedik. Ezt követően az oldatot szobahőmérsékletre hűtjük, hozzáadunk 400 ml tömény vizes ammónia-oldatot, és szobahőmérsékleten keveijük 1 órán át, majd jégszekrényben állni hagyjuk éjszakán át. A reakcióelegyet 100 ml dietiléterrel kirázzuk, csontszénnel derítjük,, majd hűtés közben tömény vizes sósav-oldattal ptî = 3-ra savanyítjuk. A kivált kristályos anyagot kiszűrjük, vízzel és dietiléterrel mossuk, majd vákuurtí exszikkátorban szárítjuk. 47,6 g (56,8%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 142°C; Rj? 0,3-0,4. 2. lépés: benziloxikarbonil-L-fenilalanil-DL-alfa-amino-pentán-szulfonsav 101,8 (340 mmól) benziloxikarbonil-L-fenilalanint 950 ml dimetilformamidban feloldunk, lehűtjük -10°C-ra, és ezen a hőmérsékleten keverés közben hozzáadunk 37,8 ml (340 mmól) N-metil-morfolint és 41,5 ml (340 mmól) pivaloil-kloridot. 10 perc keverés után -30 °C-ra hűtjük a reakcióelegyet, és 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
