181013. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új enkefalin analógok előállítására

181013

ezen a hőmérsékleten keverés közben hozzáadunk

51.7 g (309 mmól) DL-alfa-amino-pentán-szulfonsavat és 43,3 ml (309 mmól) trietilamint. A keverést 10 percig —10 °C-on, 1 órán át 0°C-on, majd szobahőmérsékleten éjszakán át folytatjuk. A reakcióelegyet csökkentett nyomáson bepároljuk, és a maradékot 1500 ml vízben feloldjuk. A vizes oldatot háromszor 300 ml dietiléterrel mossuk, jeges víz hűtés közben tömény vizes sósav-oldattal pH = 2-re savanyítjuk, és háromszor 300 ml vízzel telített n-butanollal kirázzuk. Az egyesített butanolos oldatokat 50 ml n-butanollal telített vízzel mossuk, csontszénnel derítjük, és csökkentett nyomáson bepároljuk.

82,6 g (85%) cím szerinti terméket kapunk. Rj?

0,2-0,3.

3. lépés:

L-fenilalanil-D-alfa-amino-pentán-szulfonsav

A 2. lépésben kapott védett dipeptidet (82,6 g,

262.7 mmól) 3000 ml metanolban oldjuk, és csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A reakció végén (az oldatban kimutatható anyag Rj? értéke 0,05-0,15) a kivált anyagot és a katalizátort kiszűrjük, és négyszer 300 ml metanollal mossuk. A metanolos oldatokat egyesítjük és félretesszük. A kiszűrt, katalizátorral szennyezett terméket 300 ml 50%-os vizes dimetilformamidban szuszpendáljuk, 70-80 °C-ra melegítjük, és melegen szűrjük. A katalizátort kétszer 50 ml meleg 50%-os dimetilformamiddal mossuk. Az egyesített vizes dime tilformamidos-oldatokat csökkentett nyomáson bepároljuk. A kristályos maradékot metanolban szuszpendáljuk, szűrjük, metanollal és dietiléterrel mossuk, majd vákuum-exszikkátorban szárítjuk.

34,5 g (83%) L-fenilalanil-D-alfa-amino-pentán-szulfonsavat kapunk.

Op.: 284-285 °C; [a]£° = +127,5°

(c = 1, 1 n nátrium-hidroxidban).

4. lépés:

L-fenilalanil-L-alfa-amino-pentán-szulfonsav

A 3. lépésben kapott metanolos oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk. A kristályos maradékot 100 ml acetonban szuszpendáljuk, szűrjük, acetonnal mossuk és vákuum-exszikkátorban szárítjuk. A kapott terméket (34,6 g) 700 ml 80%-os vizes etanolban szuszpendáljuk, forrásig melegítjük, a nem oldódó részt kiszűrjük, és az oldatot éjszakán át jégszekrényben állni hagyjuk. A kristályokat kiszűrjük, hideg 80%-os vizes etanollal mossuk, majd vákuum-exszikkátorban szárítjuk. A kristályosítást még kétszer megismételjük 600, ill. 500 ml 80%-os vizes etanolt alkalmazva. 20,7 g (50%) L-fenilalanil-L-alfa-amino-pentán-szulfonsavat kapunk.

Op.: 220 °C; RJ 0,52-0,60; R*1 0,4-0,5;

[a]^° = -73,1° (c = 1, 1 n nátriumhidroxidban).

5. lépés:

terc-butiloxikarbonil-L-tirozil-glicil--glicin-pentaklórfenilészter

6,0 g (15 mmól) védett tripeptidet (1. példa, 6. lépés) és 4,3 g (16 mmól) pentaldórfenolt 50 ml di-1 1

metilformamidban feloldunk, és jeges vízzel 5 °C körüli hőmérsékletre hű tjük. Hozzáadunk 3,4 g (16,5 mmól) diciklohexilkarbodiimidet, és egy órán át hűtés közben, majd éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. A kivált diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, dimetilformamiddal mossuk, majd a dimetilformamidos oldatokat bepároljuk. A párlási maradékot 100 ml etanolban szuszpendáljuk, fél órán át gőzfürdőn melegítjük, majd jeges vizes hűtés után szűrjük, hűtött etanollal mossuk, és vákuum-exszikkátorban szárítjuk. 6,7 g (69%) cím szerinti terméket kapunk.

Op.: 186 °C; Rf° 0,6-0,7.

6. lépés:

terc-butiloxikarbonil-L-tirozil-glicil-■glicil-L-fenilalanil-L-alfa-amino-pentán-szulfonsav-N-metil-morfolin-só

0,95 g (3 mmól) dipeptidet (4. lépés) 10 ml dimetilformamidban szuszpendálunk. Hozzáadunk 0,35 ml (3 mmól) N-metil-morfolint és 2,0 g (3,15 mmól) védett tripeptid aktív észtejpt(5. lépés), majd 16-20 órán át keverjük. Az első két órában öt részletben hozzáadunk 0,35 ml (3,15 mmól) N-metil-morfolint. Ezt követően a reakcióelegyet csökkentett nyomáson bepároljuk, a maradékot 20 ml etilacetátban és 60 ml vízben oldjuk. A vizes fázist kétszer 20 ml etilacetáttal mossuk, csontszénnel derítjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A párlási maradékot 20 ml etanolban oldjuk, és ismét bepároljuk. A maradékot hűtés közben dietiléterrel eldörzsöljük, szűrjük, dietiléterrel mossuk és vákuum-exszikkátorban szárítjuk. 1,82 g (76,5%) cím szerinti terméket kapunk.

Op.: 130 °C: Rj 0,25-0,35;

[a]^° = -24,8° (c = 1, dimetilformamidban).

7. lépés:

Ltirozil-glicil-glicil-L-fenilalanil-L-alfa-amino-pentán-szulfonsav

1,4 g (1,75 mmól) védett pentapeptid-sót (6. lépés) feloldunk 10 ml trifluorecetsavban, és fél órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezt követően az oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot dietiléterrel eldörzsöljük, szűrjük, dietiléterrel, etilacetáttal, majd ismét dietiléterrel mossuk, és vákuum-exszikkátorban szárítjuk. 1,05 g (99%) cím szerinti terméket kapunk.

Op.: 192-194 °C; Rfs 0,20-0,35; R® 0,35-0,45; [a]^° = +6,01° (c = 1, 90%-os ecetsavban).

3. példa

L-Tirozil-D-alanil-glicil-L-fenilalanil-L-alfa-amino-pentán-foszfonsav előállítása

0,98 g (2,4 mmól) terc-butiloxikarbonil-L-tirozil-D-alanil-glicinből [Pless és munkatársai: Helv. Chim. Acta, 62, 398 (1979)] és 0,63 g (2 mmól) L-fenilalanil-L-alfa-amino-pentán-foszfonsavból (1. példa, 4. lépés) kiindulva és mindenben az 1. példa 7. lépésében leírt módon eljárva 0,85 g (70%) cím sze12

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

6