181013. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új enkefalin analógok előállítására
7 181013 8 1. példa LTirozil-glicil-glicil-L-fenilalanil-L-alfa-amino-pentán-foszfonsav előállítása 1. lépés: benziloxikarbonil-DL-alfa-amino-pentán-foszfonsav Keverés közben feloldunk 45 g (300 mmól) benzil-uretánt 60 ml jégecet és 26,4 ml (300 mmól) foszfor-triklorid elegyében. Az oldatot jeges vízzel lehűtjük, majd keverés közben 10 °C alatti hőmérsékleten hozzáadunk 52 ml (450 mmól) n-valeraldehidet. Ezt követően a reakcióelegyet csökkentett nyomás alá helyezzük (3—4 • 104Pa). A hűtött oldat hőmérséklete előbb 2—3 °C-ra csökken, majd sósav-fejlődés indul meg, és a hőmérséklet 30—40 °C-ra emelkedik. Ekkor a hűtést eltávolítjuk és a reakcióelegyet 65—75 °C-on tartjuk 2 órán át. A melegítés közben a reakcióelegy fokozatosan sűrűsödik, majd megdermed. 3—4 óra után 18 ml vizet adunk a reakcióelegyhez és éjszakán át légköri nyomáson és szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A keletkezett kétfázisú folyadékból az ecetsavat csökkentett nyomáson kidesztilláljuk, és a maradékot 500 ml etilacetátban és 300 ni vízben feloldjuk. A szerves fázist kétszer 100 ml vízzel, kétszer 100 ml 1 n sósavval és háromszor 150 ml 1 n nátrium-hidroxiddal kirázzuk. A nátrium-hidroxidos oldatokat egyesítjük, 50 ml etilacetáttal mossuk, majd 5 n kénsavval 1-es pH-ra savanyítjuk és háromszor 200 ml etilacetáttal kirázzuk. Az etilacetátos oldatokat egyesítjük, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, és csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 500 ml diizopropiléterben és hozzáadunk 60 ml diciklohexil-amint. A kivált kristályokat szűrjük, diizopropiléterrel mossuk és levegőn szárítjuk. A terméket 150 ml forró etanolban oldjuk, majd 40-50 °C-ra hűtve 800 ml diizopropilétert adunk hozzá. A kivált kristályokat szűrjük, diizopropiléterrel mossuk és levegőn szárítjuk. Az így kapott sót (97 g, op.: 147-149 °C) feloldjuk 500 ni etilacetátban és 300 ml 5 n kénsavban, az etilacetátos fázist kétszer 300 ml 5 n kénsavval mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot petroléterrel kristályosítjuk. 54,3 g (60%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 98-100 °C; Rf 0,45-0,55. 2. lépés: DL-alfa-amino-pentán-foszfonsav 45,3 g (150 mmól) benziloxikarbonil-DL-alfa-amino-pentán-foszfonsavat (1. lépés) szuszpendálunk 500 ml vízben, hozzáadunk 42 ml (300 mmól) trietilamint, és csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, vízzel mossuk, majd a vizes oldatokat csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 150 ml 1 n vizes ecetsavban forrón oldjuk, csontszénnel derítjük, és 900 ml etanol hozzáadása után 0 °C-on állni hagyjuk. A kivált kristályokat kiszűrjük, etanollal mossuk és vákuum exszikkátórban szárítjuk. 23,1 g (92%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 275-278 °C; Rf5 0,0-0,1; Rf6 0,23-0,33. 3. lépés: ír fenil alanil-D-alfa-amino- pen tán-foszfonsav 39,8 g (150 mmól) terc-butiloxikarbonil-L-fenilalanint és 16,7 ml (150 mmól) N-metil-morfolint feloldunk 100 ml dioxán és 100 ml tetrahidro-furán elegyében. Az oldatot -10°C-ra hűtjük és keverés közben hozzáadunk 19,2 ml (145 mmól) klórhangyasav-izobutilésztert, majd 10 perc után 55 ml 4 n nátrium-hidroxidban oldott 16,7 g (100 mmól) DL-alfa-amino-pentán-foszfonsavat (2. lépés). A reakcióelegyet 5 órán át keverjük —5 és —10 °C közötti hőmérsékleten, majd csökkentett nyomáson betöményítjük (kb. 70 ml). A maradékot feloldjuk 500 ml 0,5 n kénsavban és 500 ml etilacetátban. A vizes fázist kétszer 100 ml etilacetáttal kirázzuk, majd az etilacetátos oldatokat egyesítjük, és ötször 100 ml 20%-os vizes piridinnel extraháljuk. Az etilacetátos fázisból 0,5 n kénsavval való mosás, vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás és bepárlás után 16 g (60 mmól) terc-butiloxikarbonil-L-fenilalanint nyerünk vissza. A vizes piridines oldatokat egyesítjük, és csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 200 ml etilacetátban és annyi 0,5 n kénsavban, hogy a vizes fázis pH-ja 2 legyen. A vizes fázist kétszer 50 ml etilacetáttal kirázzuk, az etilacetátos oldatokat egyesítjük, 50 ml vízzel mossuk, és csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékról 10 ml etanol és 40 ml benzol elegyét is ledesztilláljuk, majd 50 ml trifluorecetsavban oldjuk. Az oldatokat 30 perc állás után bepároljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, majd vákuum exszikkátórban szárítjuk kálium-hidroxid mellett. A terméket 70 ml ecetsavban 40-50 °C-on feloldjuk, hozzáadunk 125 ml 40—50°C-os vizet és szobahőfokon állni hagyjuk egy éjszakán át. A kivált kristályokat kiszűrjük és háromszor 10 ml 30%-os vizes ecetsavval mossuk. Az ecetsavas anyalúgot és mosó folyadékot félretesszük (lásd 1. példa, 4. lépés). A kristályos terméket vákuum exszikkátórban szárítjuk kálium-hidroxid mellett. 11,0 g (35 mmól; 70%) L-fenilalanil-D-alfa-amino-pentán-foszfonsavat kapunk. Op.: 262 °C, [a&° = + 68,9° (c = 1 n nátrium-hidroxidban); Rf 0,45—0,50. 4. lépés: L-fenilalanil-L-alfa-amino-pentán-foszfonsav A 3. lépésben kapott ecetsavas kristályosítási anyalúgot és mosó folyadékot egyesítjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A kristályos-olajos maradékról ledesztillálunk kétszer 50 ml dioxánt. A maradékot 50 ml dioxánban szuszpendáljuk, szűrjük, dioxánnal, majd éterrel mossuk és vákuum exszikkátórban szárítjuk kálium-hidroxid mellett. 10,9 g (34,8 mmól; 69,9%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 251-253 °C; [cr]*° = -53,1° (c = 1, 1 n nátrium-hidroxidban); R® 0,48—0,53. 5 10 15 20 2'5 30 35 40 45 50 55 60 65 4
