181009. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az 1-helyzetben szarkozil-,hidroxiacetil- vagy L-alfa-aminooxi propinil csoportot és 8-helyzetben észtercsoportot tartalmazó antagonista hatású angiotenzin-II analógok előállítására
15 181009 16 zelve izoláljuk. Termelés: 0,60 g védett oktapeptid-észter (az elméleti hozam 90%-a); op.: 158-162 °C; Rj3> = 0,44. 2. lépés 5 A védőcsoportok eltávolítása 0,6 g (0,42 mmól) védett oktapeptid-észtert (5. példa, 1. lépés) 2 ml dimetil-formamidban oldjuk,10 1,2 ml 2-merkapto-etanolt adunk hozzá és egy óra múlva vízmentes éterrel kicsapjuk a dinitro-fenil-csoporttól mentes oktapeptid-észtert. Ezt azután metanolban oldjuk, derítjük, majd szárazra pároljuk és éterrel dolgozva izoláljuk [0,46 g; R}4) = 0,16;15 R^ =0,52]. Újra oldjuk 25 ml 5 : 1 : 1 arányú metanol-ecetsav-víz elegyében, 0,3 g 10%-os palládiumos aktívszén-katalizátort adunk hozzá és 17 órán keresztül intenzív keverés közben hidrogéngázt buborékoltatunk át az elegyen. A reakció befejeztével 20 a katalizátort kiszűrjük, a fenti oldószereleggyel mossuk, és a mosó folyadékkal egyesített szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot víz-etanol eleggyel többször utána pároljuk, majd a szabad oktapeptid észtert éterrel eldörzsöljük és leszűrjük. Termelés: 25 0,32 g (91%). 3. lépés 30 A szabad oktapeptid-észter tisztítását az általános részben megadott módon végezzük. Rí7) = 0,22; r£8) = 0,73; RÍ9* = 0,56. Aminosav-analizis: Thr 0,92 (1); Pro 1,03 (1); Val 1,0 (1); Tyr 0,7 (1); His 1,0 (1); Arg 1,0 (1). 35 6. példa (Hidroxiecetsav1 .treonin-metilészter® )-angiotenzin-II 40 1. lépés Boc-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)-Pro-Thr-OMe 45 3,8 g (20 mmól) Thr-OMe • hidrokloridot 50 ml kloroformban oldunk, 2,8 ml (20 mmól) trietilamint és 3,8 g (10 mmól) Boc-Pro-OPfp-t adunk hozzá. A pH-érték tartása mellett egy óra múlva az oldatot 50 kirázzuk 10%-os vizes citromsavoldattal, n-sósavoldattal, végül vízzel. Szárítás és bepárlás után a kapott védett dipeptid-észtert [Rf3) = 0,77] 20 ml 8 n dioxános sósavoldatban oldjuk és 15 perc múlva a szabad dipeptid-hidrokloridot vízmentes éterrel ki- 55 csapjuk, szűrjük, mossuk [r£5)=0,2]. Ezt a terméket azonnal oldjuk 30 ml kloroformban, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 4,7 g (8 mmól) Boc-His(Dnp)-OPfp-t adunk hozzá. Az oldat pH-értékének tartása mellett egy óra múlva az olda- 60 tot kirázzuk 10%-os vizes citromsavoldattal, majd n-sósavoldattal, azután 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül vízzel. Szárítás és bepárlás után a védett tripeptid-észtert [R^ =0,47] oldjuk 20 ml 8 n dioxános sósavoldatban és 15 perc múlva víz- 65 mentes éterrel kicsapjuk a szabad tripeptid-észter-hidrokloridot [R^s)=0,23], amit azonnal oldunk 20 ml 5:1 arányú kloroform-dimetílformamíd elegyében, a pH-értéket 8-ra állítjuk és 4,0 g (10 mmól) Boc-Ile-OPfp-t adunk hozzá. Az oldat pH-értékének tartása mellett 30 perc állás után kirázzuk 10%-os vizes citromsavoldattal, majd 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül vízzel. Szárítás és bepárlás után az aktív észter feleslegét többszöri n-hexános kezeléssel eltávolítjuk. A kapott védett tetrapeptidet [R}3) = 0,45] 15 ml 8 n dioxános sósavoldatban oldjuk, majd 15 perc elteltével a szabad tetrapeptid-észter-hidrokloridot vízmentes éter hozzáadásával leválasztjuk [R^s)=0,25], Ezt a terméket azonnal oldjuk 30 ml dimetil-formamidban, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 2,05 g (3,8 mmól) Boc-Tyr(Bzl)-OPfp-t adunk hozzá. Az óidat pH-értékének tartása mellett 30 perc múlva az oldatot bepároljuk, a maradékot etil-acetátban oldjuk, 0,11 ml N,N-dimetilamino-etil-amint adunk hozzá, majd 15 perc múlva a szokásos módon kirázzuk. Szárítás és bepárlás után a kapott védett pentapeptidet [R[3) =0,57] vízmentes éterrel eldörzsöljük és leszűrjük, majd 10 ml 8 n dioxános sósavoldatban oldjuk és 15 perc múlva a szabad pentapeptid-észter-hidrokloridot vízmentes éterrel kicsapjuk, szüljük és mossuk [Rp^ =0,27]. Ezt a terméket azonnal oldjuk 20 ml dimetil-formamidban, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 1,75 g (4,5 mmól) Boc-Val-OPfp-t adunk hozzá. A pH-érték tartása mellett egy óra múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot kloroformban oldjuk és a szokásos módon kirázzuk. Szárítás és bepárlás után az olajos maradékot éterrel szilárdítjuk, szűrjük és mossuk. A kapott védett hexapeptidet [Rf =0,55] 8 ml 8 n dioxános sósavoldatban oldjuk és 15 perc múlva a szabad hexapeptid-észter-hidrokloridot vízmentes éterrel kicsapjuk, szűrjük és mossuk [Rjs)=0,23], Azonnal oldjuk 20 ml dimetilformamidban, a pH-értéket 8-ra állítjuk be és 1,8 g (4 mmól) Boc-Arg(N02 )—OPfp-t adunk hozzá. A pH-érték tartása mellett egy óra múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot kloroformban oldjuk és a szokásos módon kirázzuk. Szárítás és bepárlás után a maradékot éter és etanol 9 : 1 arányú elegyével eldörzsölve szűrjük és mossuk. Termelés: 2,7 g védett heptapeptid-észter (a His-re számított elméleti hozam 26%-a, ami 80%-os lépésenkénti termelésnek felel meg); op.: 190— -195 °C (bomlik); r£4) =0,47. 2. lépés Z-OGly-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)-Pro—Thr-OMe 1,7 g (1,4 mmól) védett heptapeptidet (6. példa, 1. lépés) 10 ml 8n dioxános sósavoldatban oldunk, 15 perc múlva a szabad heptapeptid-észter-hidrokloridot [R}s) =0,21] vízmentes éter hozzáadásával kicsapjuk és azonnal oldjuk 20 ml dimetilformamidban, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 0,82 g (2,1 mmól) Z-OGly—OPfp-t adunk hozzá. A pH-érték tartása mellett 30 perc múlva az oldatot 40 ml kloroformmal hígítjuk, majd n-sósavoldattal és 8
