181009. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az 1-helyzetben szarkozil-,hidroxiacetil- vagy L-alfa-aminooxi propinil csoportot és 8-helyzetben észtercsoportot tartalmazó antagonista hatású angiotenzin-II analógok előállítására
13 181009 14 2,95 g (5 mmól) Boc—His(Dnp)—OPfp-t adunk hozzá. Az oldat pH-értékének tartása mellett 30 percig állni hagyjuk, majd az oldószert ledesztilláljuk és a maradékot etilacetátban oldjuk, 0,11 ml N,N-dimetilamino-etil-amint adunk hozzá, majd 10 perc múlva nátriumkloriddal telített vizes 10%-os citromsavoldattal, majd vízzel kirázzuk. Szárítás és bepárlás után nyert védett tripeptidet [Rp)=0,47] azonnal oldjuk 5 ml 8 n dioxános sósavoldatban, 15 perc elteltével a szabad tripeptid hidrokloridot [Rf =0,3] vízmentes éterrel leválasztjuk, szűrjük és mossuk. A terméket azonnal oldjuk 10 ml dimetil-formamidban, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 2,0 g (5 mmól) Boc—Ile—OPfp-t adunk hozzá. Az oldatot a fenti pH-érték fenntartása mellett 30 percig állni hagyjuk, majd az oldószert ledesztilláljuk, a maradékot etil-acetátban oldjuk és a szokásos módon kirázzuk. Az oldat szárítása és bepárlása után a védett tetrapeptidet [R^2^=0,28] éter és n-hexán = 3:7 elegyével e) dörzsöljük és leszűrjük. A terméket azonnal oldjuk 7 ml 8 n dioxános sósavoldatban, majd 15 perc elteltével a szabad tetrapeptid-hidrokloridot vízmentes éterrel kicsapjuk, szűrjük és mossuk [R^ =0,27]. Ezt a terméket 10 ml dimetil-formamidban oldjuk, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 2,7 g (5 mmól) Boc-Tyr(Bzl)-OPfp-t adunk hozzá. Az oldatot a fenti pH-érték fenntartása mellett 30 percig állni hagyjuk, majd az oldószert ledesztilláljuk, a maradékot etil-acetátban oldjuk, 0,11 ml N,N-dimetilamino-etil-amint adunk hozzá és 15 perc múlva nátriumkloriddal telített vizes 10%-os citromsav-oldattal, majd vízzel kirázzuk. Szárítás és bepárlás után a védett pentapeptidet [R£2^ = 0,51] vízmentes éterrel eldörzsöljük, leszűrjük, majd 5 ml 8 n dioxános sósavoldatban oldjuk és 15 perc múlva vízmentes éter hozzáadásával kicsapjuk a szabad pentapeptid-hidrokloridot [R^5' = 0,48], szűrjük, mossuk és oldjuk 20 ml dimetil-formamidban. Az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 1,9 g (5 mmól) Boc-Val-OPfp-t adunk hozzá. Az oldatot a fenti pH-érték fenntartásával 3Ö percig állni hagyjuk, majd az oldószert ledesztilláljuk, a maradékot kloroformban oldjuk és a szokásos módon kirázzuk. Szárítás és bepárlás után a védett hexapeptidet [R^ =0,44] vízmentes éterrel kezelve izoláljuk, majd oldjuk 10 ml 8 n dioxános sósavoldatban és 15 perc elteltével a szabad hexapeptid-hidrokloridot [R)4^ = 0,36] vízmentes éterrel kicsapjuk, szűrjük és mossuk. Azonnal oldjuk 15 ml dimetil-formamidban az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 2,25 g (5 mmól) Boc-Arg(N02 )-OPfp-t adunk hozzá. Az oldatot a fenti pH-érték fenntartása mellett egy óra hosszat állni hagyjuk, majd 45 ml kloroformmal hígítjuk és a szokásos módon kirázzuk. Szárítás és bepárlás után etanollal kezelve kapjuk a védett heptapeptid-észtert. Termelés: 3,3 g (Thr-ra számítva 56%, ami 91%-os lépésenként i termelésnek felel meg); op.: 188-193 °C; R$3)=0,38; r£4* = 0,87. A védett heptapeptidből 1,95 g-ot (1,5 mmól) 10 ml 8 n dioxános sósavoldatban oldunk és 20 perc múlva a szabad heptapeptid-hidrokloridot [Rf = 0,20] vízmentes éterrel kicsapjuk, szűrjük, mossuk és 15 ml dimetil-formamidban oldjuk. Az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk, majd 0,87 g (2,25 mmól) Z-Sar-OPfp-t adunk hozzá. Az oldatot 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 pH-értékének tartása mellett egy óra hosszat állni hagyjuk, majd 45 ml kloroformmal hígítjuk, vizes 10%ros citromsav-oldattal, n-sósavoldattal, végül vízzel kirázzuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékként kapott védett oktapeptid-észtert etanollal eldolgozva szüljük és mossuk. Termelés 1,85 g (87%); op.: 202-208 °C; R^3) =0,20; r£4) =0,86. 2. lépés A védőcsoportok eltávolítása 1,85 g (1,4 mmól) védett oktapeptid-észtert (4. példa, 1. lépés) 8 ml dimetil-formamidban oldunk és 2,6 ml 2-merkapto-etanolt adunk hozzá. Az oldatot egy óráig keverjük, majd vízmentes száraz éter hozzáadásával kicsapjuk a dinitrofenil-csoporttól mentes védett oktapeptidet [1,6 g; R^4) = 0,52], leszűrjük, mossuk, majd 30 ml 5:1:1 arányú metanol-ecetsav-víz elegyében oldjuk és 1,0 g 10%-os palládiumos aktívszén-katalizátort adunk hozzá. Ezután az oldaton 30 órán keresztül, intenzív keverés mellett hidrogéngázt buborékoltatunk át, majd a reakció befejeztével a katalizátort kiszűrjük, a fenti oldószer eleggyel mossuk, és a mosófolyadékkal egyesített szűrletet szárazra pároljuk. A szabad oktapeptid-észtert éter és etanol 2 : 1 arányú elegyével kezelve izoláljuk. Termelés: 0,98 g (83%). 3. lépés: A nyers szabad oktapeptid észtert az általános részben megadott módon tisztítjuk. A kapott [szarkozin1, treonin(Me)-metilészter ]-angiotenzin-II végtermék jellemzői: r£6)=0,29; R|s) = 0,55 ; R)9)=0,27; Aminosav-analízis: His 1,03 (1); Arg 9,95 (1); Thr 0,93 (1); Pro 1,03 (1); Val 1,15 (1); Ile 1,03 (1); Tyr 0,90(1); Sár 1,0(1). 5. példa [Hidroxiecetsav1, treonin(Me)-metilészter8 ]-angiotenzin-II 1. lépés Z-OGly—A rg(N02 )-Val-Tyi(Bzi)-Ile-His(Dnp)—Pro- TÍu(Me)—OMe 0,62 g (0,47 mmól) Boc-Arg(N02 )-Val-Tyr(Bzl)-Ile—His(Dnp)-Pro-Thr(Me)-OMe-t (4. példa, 1. lépés) 4 ml 8 n dioxános sósavoldatban oldunk, 15 perc múlva vízmentes éterrel kicsapjuk a szabad heptapeptid • HCl-t [Rj5) = 0,35] szűrjük, mossuk és azonnal oldjuk 10 ni dimetil-formamidban. Az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk és 0,8 g (2 mmól) Z-OGly-OPfp-t adunk hozzá. Egy ór? múlva — a pH-érték tartása mellett — az oldatot 30 ml kloroformmal hígítjuk és kirázzuk 10%-os vizes citromsav-oldattal, majd n-sósavoldattal, végül vízzel. Szárítás és bepárlás után a védett oktapeptid-észtert éter és etanol = 9:1 arányú elegyével ke-7
