181009. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az 1-helyzetben szarkozil-,hidroxiacetil- vagy L-alfa-aminooxi propinil csoportot és 8-helyzetben észtercsoportot tartalmazó antagonista hatású angiotenzin-II analógok előállítására
11 181009 12-Arg(TOs)—OPfp-t adunk hozzá. Az oldatot a fenti pH-érték fenntartásával egy óra hosszat állni hagyjuk, majd az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot kloroformban oldjuk, az oldatot 10%-os vizes citromsav-oldattal, n-sósavoldattal, majd 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül vízzel kirázzuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot vízmentes éterrel eldörzsöljük és leszűrjük. Dy módon 5,8 g Boc—Arg(T os)—Val—T yr(Bzl)—Ile—His(Dnp)— -Pro-OBzl védett hexapeptid-észtert [R}3) = 0,63] kapunk (a His-re számított elméleti hozam 42%-a, ami 84%-os lépésenkénti termelési hányadnak felel meg); op.: 167-174 °C. 2. lépés Boc-Arg(Tos)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His-Pro—OH 2,8 g (2,1 mmól) védett hexapeptidet (3. példa, 1. lépés) 8 ml dimetil-formamidban oldunk, hozzáadunk 2,9 ml 2-merkapto-etanolt és egy órai keverés után vízmentes éterrel kicsapjuk a dinitrofenil-csoporttól mentes terméket [Rf =0,17], Ezt szuszpendáljuk 30 ml dioxánban és 12 ml n-nátrium-hidroxid-oldatot adunk hozzá. Egy óra múlva az oldat kitisztul, ekkor az oldat pH-értékét n-sósawal 7-re állítjuk és a dioxánt ledesztilláljuk. A maradék vizes oldat pH-értékét 3-ra állítjuk és a kívánt csapadékot 60 ml 2:3 arányú dimetil-formamid-kloroform elegyében oldjuk, a szerves oldatot a vizes résztói elválasztjuk, majd a szerves oldószereket ledesztilláljuk. Termelés: 2,3 g (96%) hexapeptid; R(s) =0,37; op.: 160-164 °C (bomlik). 3. lépés Boc—Arg(T os)—V al—Ty r(Bzl)—Ile— —His—Pro—Ile—OMe 1,25 g (1,1 mmól) hexapeptidet (3. példa, 2. lépés) 15 ml dimetil-formamidban oldunk, hozzáadunk 0,5 ml (3,6 mmól) trietil-amint és 0,65 g (3,6 mmól) Ile—OMe—hidrokloridot, valamint diciklohexil-karbodiimid és pentafluor-fenol 1,35 g (2 mmól) 1:3 arányú kristályos komplexét. A pH-érték tartása mellett 24 óra múlva újabb fenti mennyiségű komplexet és Ile-OMe-hidrokloridot adunk hozzá; újabb 24 óra múlva a reakcióelegyet 45 ml kloroformmal hígítjuk és kirázzuk kétszer 20 ml 10%-os citromsav, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül vízzel. Szárítás és bepárlás után a védett heptapeptid-észtert [R£10) = 0,26] száraz éter hozzáadásával leválasztjuk. A terméket 20 ml etanolban forrón oldjuk, majd hűtés után szűrjük. Termelés 0,95 g (65%) Boc-Arg(Tos)-Val—Tyr(Bzl)—De—His—Pro—De—OMe védett heptapeptid-észter. 4. lépés Boc- L—O A1 a-Arg(T os)-Val-T yr(Bzl)—- E e-His-Pro-Ile-OMe 0,95 g (0,75 mmól) védett heptapeptid-észtert (3. példa, 3. lépés) 3 ml 8 n dioxános sósav-oldatban oldunk, majd 15 perc múlva vízmentes éterrel ki6 csapjuk, leszűrjük, és mossuk a szabad heptapeptid-észter-hidrokloridot [Rj5^ = 0,24], Ezt azonnal oldjuk 10 ml dimetil-formamidban, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 0,5 g (1,1 mmól) Boc-OAla— -OPfp-t adunk hozzá. Az oldat pH-értékének tartása mellett egy óra múlva 30 ml kloroformot adunk hozzá és 10%-os citromsav-oldattal, majd vízzel kirázzuk. Szárítás és bepárlás után a védett oktapeptid-észtert éterrel eldörzsöljük és leszűrjük. Dy módon 0,83 g Boc-L-OAla-Arg(Tos)-Val—Tyr(Bzl)-Ee-His—Pro- De—OMe védett oktapeptid-észtert (87%) kaounk; op.' 143-146 °C, (bomlik); R{4) = 0,34. 5. lépés A védőcsoportok eltávolítása 0,75 g (0,57 mmól) védett oktapeptidet (3. példa, 4. lépés 0,5 ml tioanizolt tartalmazó 2 ml cseppfolyós hidrogén-fluoridban oldunk. A reakcióelegyet 1,5 óráig 0 °C-on tartjuk, majd a szabad oktapeptidet vízmentes éter hozzáadásával leválasztjuk. Ezt a terméket 30 ml metanolban oldjuk és vízmentes éterrel újból kicsapjuk. Dy módon 0,5 g (89%) nyers szabad oktapeptid-észtert kapunk. 6; lépés A szabad oktapeptid-észtert az általános részben leírt módon tisztítjuk. Az így kapott L-a-aminooxipropionsav1, izoleucin-metilészter8/-angiotenzin-II végtermék jellemzői: R^7) =0,30; R^ =0,68; Rí9-1 =0,46. Aminosav-analízis: Pro 1,0 (1); Val 1,05 (1); Ile 2,0 (2); Tvr 0,73 (1); His 0,85 (1); Arg 0,97 (1). 4. példa (Szarkozin1 ,treonin(Me)-metilészter8 )•angiotenzin-II előállítása 1. lépés Z-Sar-Arg(NQ2 )-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)—Pro—Thr(Me)—ÖMe 0,68 g (4,5 mmól) Thi(Me)-OMe 10 ml kloroformmal készített oldatához 2,28 g (6 mmól) Boc-Pro-OPfp-t adunk. Az oldat pH-értékét 8-on tartva 30 percig állni hagyjuk, majd az oldószert leT desztilláljuk, a maradékot etil-acetátban oldjuk és 0,22 ml N,N-dimetilamino-etil-amint adunk hozzá. 15 perc múlva kirázzuk nátriumkloriddal telített lO^os vizes citromsav-oldattal, majd n-sósav-oldattal, végül vízzel. Szántás és bepárlás után a védett dipeptidet [R|2) = 0,76] izolálás nélkül oldjuk 3 ml 8 n dioxános sósavoldatban és 15 perc múlva vízmentes éterrel hígítjuk és bepároljuk. A maradékként kapott szabad dipeptid-hidrokloridot [Rf4-* = 0,18] azonnal oldjuk 10 ml dimetil-formamidban, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
