181009. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az 1-helyzetben szarkozil-,hidroxiacetil- vagy L-alfa-aminooxi propinil csoportot és 8-helyzetben észtercsoportot tartalmazó antagonista hatású angiotenzin-II analógok előállítására
9 181009 10 1. lépés Z-0Gly-Arg(N02 )-Val-Tyr(Bzl)-De-His(Dnp)-Pro-De-OMe 1,5 g (0,8 mmól) Boc-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)—De—His(Dnp)—Pro—Ile—OMe — előállítva az 1. példa 1. lépése szerint — 6 ml 8 n dioxános sósav-oldattal készített oldatát 20 percig állni hagyjuk, majd vízmentes éter hozzáadásával leválasztjuk a kapott terméket. Az így kapott szabad heptapeptid-hidrokloridot [RJs)=0,7] mosás után azonnal oldjuk 10 ml dimetil-formamidban, az oldat pH-értékét trietil-aminnal 8-ra állítjuk be és 0,46 g (1,17 mmól) Z—OGly-OPfp-t adunk hozzá. Az elegyet 30 percig állni hagyjuk, majd 30 ml kloroformot adunk hozzá, 10%-os vizes citromsav-oldattal, majd n-sósav-oldattal, végül vízzel kirázzuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot éténél eldörzsöljük és leszűrjük. Ily módon 1,05 g védett oktapeptidet [R^3* =0,24] kapunk (az elméleti hozam 93%-a); OP.: 140—145 °C. 2. lépés A védőcsoportok eltávolítása 1,05 g (0,74 mmól) Z-OGly-Arg(N02 )-Val-Tyr(Bzl)—Ile-His (Dnp)-Pro-Ile-OMe 5 ml dimetil-formamiddal készített oldatához 2,3 ml 2-merkapto-etanolt adunk. Az elegyet 1,5 óra hosszat állni hagyjuk, majd vízmentes éter hozzáadásával leválasztjuk a terméket, leszűrjük és mossuk. Ily módon 0,85 g védett, de dinitro-fenil-csoportot már nem tartalmazó oktapeptidet [R|4) = 0,40] kapunk (az elméleti hozam 85%-a). 0,75 g (0,6 mmól) fenti módon kapott védett oktapeptidet 20 ml 5:1:1 arányú metarol-ecetsav-víz elegyben oldunk, az oldathoz 0,8 g 10%-os palládiumos aktívszén-katalizátort adunk és élénk keverés közben 18 óra hosszat hidrogéngázt buborékoltatunk át az oldaton. A reakció befejeztével a katalizátort kiszűrjük, a fenti oldószereleggyel mossuk, majd a mosófolyadékkal egyesített szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot vizes etanollal többször utánapároljuk, majd vízmentes éterrel kezeljük, leszűrjük és megszárítjuk. Ily módon 0,48 g szabad oktapeptid-metilésztert kapunk (az elméleti hozam 82%-a). 3. lépés A fenti módon kapott nyers oktapeptid-metilésztert a fentebb leírt általános módszerrel tisztítjuk; a kapott termék jellemzői: R^7)=0,29; r£8^ = 0,72; R^9) = 0,60; EGlu(pH = 1,9): 0,60; Aminosav-analízis: Pro 1,0 (1); Val 1,0 (1); Ile (1,7 (2); Tyr 0,88 (1); His 1,02 (1); Arg 9,96 (1). 3. példa (L-a-ami nooxipropionsav izoleucin- metilészter® )-angiotenzin-II előállítása 1. lépés Boc—Arg(Tos)—Val—Tyr(Bzl)—Ile— —His(Dnp)—Pro—OBzL 2,9 g (12 mmól) Pro-OBzl • HCl 50 ml kloroformmal készített oldatához 1,68 ml trietil-amint és 5,87 g (10 mmól) Boc-His(Dnp)-OPfp-t adunk. Az oldatot a pH-érték állandó szinten tartása mellett egy óra hosszat keverjük, majd 25 ml 10%-os vizes citromsav-oldattal, n-sósav-oldattal, azután 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül vízzel kirázzuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot n-hexánnal eldörzsöljük és leszűrjük. Az így kapott védett dipeptidet [R^3*=0,80] 13 ml 8n dioxános sósav-oldatban oldjuk, az oldatot 15 percig állni hagyjuk, majd vízmentes éter hozzáadásával leválasztjuk a terméket. A kapott, leszűrt és mosott szabad dipeptid-hidrokloridot [R^4* = 0,24] azonnal oldjuk 30 ml dimetil-formamidban, az oldat pH-értékét trietil-aminnal 8-ra állítjuk be és 4,7 g (12 mmól) Boc-De—OPfp-t adunk hozzá. Az oldatot állandó pH-értéken tartva egy óra hosszat állni hagyjuk, majd az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot kloroformban oldjuk, az oldatot 10%-os vizes citromsav-oldattal, azután n-sósavoldattal, majd 5%-os nátriumhidrogén-karbonát-oldattal, végül vízzel kirázzuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot éter és n-hexán 1 :2 arányú elegyéve! eldörzsöljük és leszűrjük. Az így kapott védett tripeptidet [R^3* =0,82] 15 ml 8 n dioxános sósav-oldatban oldjuk, az oldatot 15 percig állni hagyjuk, majd vízmentes éter hozzáadásával leválasztjuk a terméket. A leszűrés és mosás után kapott szabad tripeptid-hidrokloridot [R^s)=0,38] azonnal oldjuk 50 ml dimetil-formamidban, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 5,9 g (11 mól) Boc-Tyr(Bzl)-OPfp-t adunk hozzá. Az oldatot állandó pH-érték fenntartása mellett 30 percig állni hagyjuk, majd az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot etil-acetátban oldjuk és 0,22 ml N,N-dimetilamino-etil-amint adunk az oldathoz. Az elegyet 15 percig állni hagyjuk, majd 10%-os vizes citromsav-oldattal, azután n-sósav-oldattal, végül vízzel kirázzuk, szárítjuk és bepároljuk. A kapott maradékot éterrel eldörzsöljük és leszűrjük. Az így kapott védett tetrapeptidet [R[3) = 0,73] azonnal oldjuk 20 ml 8 n dioxános sósavoldatban, az oldatot 15 percig állni hagyjuk, majd vízmentes éter hozzáadásával leválasztjuk a terméket, szűrjük, és mossuk. Az így kapott szabad tetrapeptid-hidrokloridot [Rp^=0,69] azonnal oldjuk 50 ml dimetil-formamidban, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 4,2 g (11 mól) Boc-Val-OPfp-t adunk hozzá. Az oldatot a fenti pH-érték fenntartásával egy óra hosszat állni hagyjuk, majd az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot etil-acetátban oldjuk és az oldatot a szokásos módon kirázzuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot n-hexánnal, majd vízmentes éterrel kezeljük és leszűrjük. Az így kapott védett pentapeptidet [r£3) =0,65] 20 ml 8 n dioxános sósavoldatban oldjuk és az oldatot 15 percig állni hagyjuk, majd vízmentes étert adunk hozzá, a levált terméket leszűrjük és mossuk. Az így kapott szabad pentapeptid-hidrokloridot [R^ = 0,57] azonnal oldjuk 60 ml dimetil-formamidban, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 5,94 g (10 mmól) Boc— 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
