181009. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az 1-helyzetben szarkozil-,hidroxiacetil- vagy L-alfa-aminooxi propinil csoportot és 8-helyzetben észtercsoportot tartalmazó antagonista hatású angiotenzin-II analógok előállítására
7 181009 8 N,N-dimetilamino-etil-amint adunk hozzá, 10 percig állni hagyjuk, majd nátrium-kloriddal telített 10%-os citromsav-oldattal, azután n-sósav-oldattal, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül vízzel kirázzuk, szárítjuk és szárazra pároljuk. A maradékként kapott védett tripeptidet [R^2) = 0,45] izolálás nélkül oldjuk 10 ml 8 n dioxános sósavoldatban, az oldatot 15 percig állni hagyjuk, majd vízmentes éter hozzáadásával leválasztjuk a szabad tripeptid-hidrokloridot, leszűrjük és mossuk. Az így kapott szabad tripeptid-hidrokloridot [rJ5)=0,30] azonnal oldjuk 15 ml dimetil-formamidban, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 2,4 g (6 mmól) Boc-De-OPfp-t adunk hozzá. Az oldatot állandó pH-érték fenntartása mellett 30 percig állni hagyjuk, azután az oldószert eltávolítjuk, a maradékot etil-acetátben oldjuk, az oldatot 10%-os vizes citromsav-oldattal, n-sósavoldattal, végül vízzel kirázzuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot éter és n-hexán 1 :9 arányú elegyével eldörzsöljük és leszűrjük. Az így kapott védett tetrapeptidet [R[2)=0,31] 7 ml 8n dioxános sósav-oldatban oldjuk, az oldatot 15 percig állni hagyjuk, majd vízmentes éter hozzáadásával leválasztjuk a terméket és leszűrjük. Az így kapott szabad tetrapeptid-hidrokloridot [Rp'=0,38] 20 ml kloroform és 10 ml dimetil-formamid elegy ében oldjuk, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be, és 2,96 g (5,5 mmól) Boc-Tyr(Bzl)-OPfp-t adunk hozzá. Az oldatot állandó pH-értéken tartva 15 percig állni hagyjuk, majd az oldószert elpárologtatjuk, majd a maradékot etil-acetátban oldjuk és 0,22 ml N,N-dimetilamino - etil-amint adunk hozzá. Az elegyet 10 percig állni hagyjuk, majd 10%-os vizes citromsav-oldattal, n-sósav-oldattal, végül vízzel kirázzuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot vízmentes éterrel eldörzsöljük és leszűrjük. Az így kapott védett pentapeptidet [R^2) = 0,52] 10 ml 8 n dioxános sósavoldatban oldjuk, az oldatot 15 percig állni hagyjuk, majd a terméket vízmentes éter hozzáadásával leválasztjuk, leszűrjük és mossuk. A kapott szabad pentapeptid • hidrokloridot [R^s)=0,8] azonnal feloldjuk 20 ml dimetil-formamidban, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 2,3 g (6 mmól) Boc-Val—OPfp-t adunk hozzá. Az oldatot állandó pH-értéken tartva egy óra hosszat állni hagyjuk, majd az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot kloroformban oldjuk, ezt az oldatot 10%-os vizes citromsav-oldattal, n-sósavoldattal, végül vízzel kirázzuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot vízmentes éterrel eldörzsöljük és leszűrjük; az így kapott védett hexapeptidet [R^2^ =0,43] azonnal oldjuk 8 n dioxános sósav-oldatban és az oldatot 15 percig állni hagyjuk, majd a terméket vízmentes éter hozzáadásával leválasztjuk, leszűrjük és mossuk. A kapott szabad hexapeptid-hidrokloridot azonnal oldjuk 15 ml dimetilformamidban, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 2,6 g (6 mmól) Boc-Arg(N02)-OPfp-t adunk hozzá. Az oldatot állandó pH-érték fenntartása mellett 30 percig állni hagyjuk, majd 45 ml kloroformot adunk hozzá, az elegyet n-sósav-oldattal, majd vízzel kirázzuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot etil-acetáttal eldörzsöljük és leszűrjük. Ily módon 3,3 g védett heptapeptidet [Rf3) = 0,37] kapunk (a Boc—Pro-OPfp-re számított elméleti hozam 51%-a, ami 90% lépésenkénti termelési hányadnak felel meg). 4 2. lépés Z—Sár—Arg(N02 )—Val—'Tyr(Bzl)—Ile—His(Dnp)—Pro—He—OMe 3,3 g (2,5 mmól) Boc-Arg(N02)—Val-Tyr(Bzl)— —De-His(Dnp)—Pro—Ile—OMe 15 ml 8 n dioxános sósav-oldattal készített oldatát 20 percig állni hagyjuk, majd vízmentes étert adunk hozzá, a levált terméket leszűrjük és mossuk; az így kapott szabad heptapeptid-hidrokloridot [R^=0,7] azonnal oldjuk 15 ml dimetil-formamidban, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 2,4 g (6 mmól) Z-Sar-OPfp-t adunk hozzá. Az oldatot állandó pH-érték fenntartása mellett 30 percig állni hagyjuk, majd 45 ml kloroformot adunk hozzá, az elegyet .n-sósav-oldattal, majd vízzel kirázzuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot etanollal eldörzsöljük és leszűrjük. Ily módon 3,17 g védett oktapeptidet [R^4) =0,82] kapunk (az elméleti hozam 89%-a); op.: 197—209 °C. 3. lépés A védőcsoportok eltávolítása 2,59 g (1,83 mmól) Z—Sar-Arg(N02)—Val— -Tyr(Bzl)-De-His(Dnp)-Pro-Ile-OMe 5 ml dimetil-formamiddal készített oldatához 4,6 ml 2-merkapto-etanolt adunk, az elegyet 1,5 óra hoszszat keverjük, majd vízmentes éter hozzáadásával a terméket leválasztjuk és leszűrjük. By módon 2,0 g védett, de dinitro-fenil-csoportot már nem tartalmazó oktapeptidet [R£4) =0,42] kapunk (az elméleti hozam 87%-a). A kapott védett oktapeptidet 40 ml 5:1:1 arányú metanol-ecetsav-víz elegyben oldjuk, az oldathoz 1,0 g 10%-os palládiumos aktívszén-katalizátort adunk és élénk keverés közben 20 óra hosszat hidrogéngázt buborékoltatunk át az oldaton. A reakció befejeztével a katalizátort kiszűrjük, a fenti oldószereleggyel mossuk, majd a mosófolyadékkal egyesített szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot vizes etanollal többször utánapároljuk, majd vízmentes éterrel kezeljük, leszűrjük és megszárítjuk. Ily módon 1,56 g szabad oktapeptid-metilésztert (az elméleti hozam 98%-a) kapunk. 4. lépés A fenti módon kapott nyers szabad oktapeptidmetilésztert a leírásnak a példák előtti részében ismertetett általános módszerrel tisztítjuk. Az így kapott (szarkozín1-, izoleucin-metilészter8)-Angiotenzin-II jellemzői: R^7) =0,19; R(f8) =0,59; r}9) = = 0,38; EGlu (pH = 1,9): 1,00. Aminosav-analízis: Pro 1,07 (1); Val 1,1 (1); Tyr 0,8 (1); His 1,03 (1); Arg 1,0 (1); De 1,87 (2); Sár 1,0 (1)-2. példa Hidroxiecetsav1, izoleucin-metilészter® )-angiotenzin-II 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
