181008. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-helyzetben szarkozil-csoportott és 8 helyzetben alfa -hidroxi karbonsavat tartalmazó antagonista hatású angiotenzin-II analógok előállítására
7 181008 8 zük. Szükség esetén a terméket ugyancsak gradiens-elúció segítségével rekromatografáljuk. 1. példa (Szarkozin1, L-tejsav8 >angiotenzin-II előállítása 1. lépés Boc -Pro—Lac-OBzl előállítása 2,15 g (10 mmól) Boc—Pro-OH-t 10 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készített oldatához 0°C-on, keverés közben, 10 perc alatt 2,4 g (15 mmól) karbonil-diimidazolt adagolunk. A reakcióelegyhez ezután 0°C-on 15 perc alatt hozzácsepegtetjük 1,8 g (10 mmól) L-tejsav-benzilészter 10 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készített és előzőleg 0°C-ra hűtött oldatát. A reakcióelegyet ezután 30 percig 0 °C-on, 2 óra hosszat 20 °C-on keverjük, majd másnapig hűtőszekrényben tartjuk. Másnap az oldószert eltávolítjuk, a maradékot 30 ml kloroformban oldjuk és négyszer 10 ml n-sósavoldattal, majd vízzel, azután kétszer 15 ml vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül ismét vízzel kirázzuk. A kloroformos oldatot ezután szárítjuk, majd súlyállandóságig bepároljuk. A maradékként kapott olajat exszikkátorban foszfor-pentoxid felett tovább szárítjuk. Termelés: 3,0 g kromatográfiásan egységes Boc-Pro-Lac-OBzl (az elméleti hozam 80%-a). = 0,32; Rp> = 0,57. 2. lépés Z-Sar-Arg(N02 )-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)-Pro-Lac-OBzl 2,85 g (7,5 mmól) Boc-Pro-Lac-OBzl 15 ml 8 n sósavas dioxánoldattal készített oldatát 15 percig állni hagyjuk, majd 30 ml száraz étert adunk hozzá és szárazra pároljuk. A maradékként kapott szabad 0-prolil-tejsavészter-hidrokloridot [R|s) = 0,37] 20 ml dimetil-formamidban oldjuk, az oldat pH-ját trietil-aminnal 8-ra állítjuk és hozzáadunk 2,9 g (5 mmól) Boc-His(Dnp)-OPfp-t. A tartása mellett a reakcióelegyt pH = 8 állandó fenntartása mellett a reakcióelegyet pH = 8 állandó az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot etilacetátban oldjuk és ezt az oldatot 10%-os citromsavoldattal, majd n-sósavoldattal, 59^os nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal, végül vízzel kirázzuk. Az oldószer szárítása és eltávolítása után a védett trípeptidet [R^2* = 0,77] izolálás nélkül 10 ml 8 n sósavas dioxánban oldjuk, majd 20 perc múlva a szabad tripeptid-hidrokloridot száraz éterrel kicsapjuk, leszűrjük és éterrel mossuk [R[4) = 0,10]. A szabad tripeptid-hidrokloridot 20 ml dimetil-formamidban oldjuk, az oldat pH-ját trietil-aminnal 8-ia állítjuk és 2,78 g (7,5 mmól) Boc Ile-OPfp-t adunk hozzá. A fenti pH tartása mellett a reakcióelegyet egy óra hosszat keverjük, majd az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot etilacetátban oldjuk és a fent leírt módon kirázzuk. Szárítás és bepárlás után a maradékot n-hexánnal eldörzsöliük és leszűrjük, a kapott védett tetrapeptidet [Rf - 0,67] 10 ml 8 n sósavas dioxánban oldjuk és 15 perc múlva vízmentes éter hozzáadásával kicsapjuk a szabad tetrapeptid-hidrokloridot [R^5' = 0,52]. Ezt újra oldjuk 20 ml dimetil-formamidban, az oldat pH-ját ismét 8-ra állítjuk és 3,24 g (6 mmól) Boc—Tyr(Bzl)-OPfp-t adunk hozzá. A pH-érték tartása mellett a reakcióelegyet 30 percig keverjük, majd az oldószert etil-acetátra cserélve, a fölös aktívészter eltávolítása céljából 0,22 ml N,N-dimetilamino-etilamint adunk hozzá. 15 perc múlva az oldatot 10%-os citromsavval, majd n-sósawal, vízzel, azután 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és végül vízzel ismét kirázzuk. Szárítás és bepárlás után a maradékot n-hexán és éter 8 :2 arányú elegyével eldörzsöliük és leszűrjük. A kapott védett pentapeptidet [R}3) = 0,72] ezután 10 ml 8 n sósavas dioxánban oldjuk, majd 15 perc elteltével vízmentes éter hozzáadásával lecsapjuk a szabad pentapeptid-hidrokloridot. Ezt aztán 20 ml dimetil-formamidban oldjuk, a pH-t trietil-aminnal 8-ra állítjuk és 2,6 g (6,8 mmól) Boc-Val-OPfp-t adunk hozzá. A pH-érték tartása mellett az oldatot egy óra hosszat keverjük, majd az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot etil-acetátban oldjuk és az oldatot a szokásos módon kirázzuk. Szárítás és bepárlás után a maradékot vízmentes éterrel eldörzsöljük és leszűrjük. A kapott védett hexapeptidet [r}3) = 0,83] ezután 10 ml 8n sósavas dioxánban oldjuk és 15 perc múlva vízmentes éter hozzáadásával leválasztjuk a szabad hexapeptid-hidrokloridot [R[s) =0,65]. Ezt a terméket 20 ml dimetilformamidban oldjuk, az oldat pH-értékét trietilaminnal 8-ra állítjuk és 2,2 g (5 mmól) Boc-Arg(N02 )~OPfp-t adunk hozzá. A pH-érték tartása mellett 1 óra múlva 60 ml kloroformmal hígítjuk az oldatot, és 10%-os citromsavoldattal, n-sósawal, majd vízzel kirázzuk. Szárítás és bepárlás után a védett heptapepüdet [R^ = 0,65] etanol és éter 1 : 1 arányú elegyével izoláljuk. A védett heptapeptidet 10 ml 8n sósavas dioxánban oldjuk és 15 perc múlva vízmentes éterrel kicsapjuk, szűrjük, mossuk és megszárítjuk a szabad heptapeptid-hidrokloridot [R^s > = 0,40], Végül a szabad heptapeptid-hidrokloridot 15 ml dimetil-formamidban oldjuk, az oldat pH-ját 8-ra állítjuk és 1,8 g (5 mmól) Z-Sar—OPfp-t adunk hozzá. A pH-érték tartása mellett az oldatot 30 percig keverjük, majd 45 ml kloroformmal hígítjuk és vízzel kirázzuk. Szárítás és bepárlás után a maradékként kapott védett oktapeptidet vízmentes éterrel eldörzsöljük és leszűrjük. Ily módon 2,12 g cím szerinti védett oktapeptidet kapunk (a His-re számított elméleti hozam 29,6%-a, ami lépésenként 82%-os termelésnek felel meg). Rp> = 0,465; op.: 204-213 °C. 3. lépés A védő csoportok eltávolítása 1,45 g (1 mmól) Z-Sar-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)-Pro-Lac-OBzl 5 ml dime til-formamiddal készített oldatához 2,3 ml (30 mmól) 2-merkapto-etanolt adunk. Egy órai keverés után a reakcióelegyhez száraz étert adunk és a kapott védett, de Dnp-csoportot már nem tartalmazó 5 10 15 20 2‘5 30 35 40 45 50 55 60 65 4
