180926. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a központi idegrendszerre ható, új TRH-analóg tripeptid-amidok előállítására
7 180926 8 HPro L-homoprolin Kic L-2-Ketoimidazolidin-4-karbonsav Kpc L-6-Ketopiperidin-2-karbonsav Oro orotsav Pip L-pipekolinsav Tea L-tiazolidin-4-karbonsav Glp piroglutaminsav DCC diciklohexil-karbodiimid DCU diciklohexil-karbamid PFPOH pentafluorfenol DMFA dimetilformamid A vegyületek olvadáspontját Dr. Tottoli-féle (Büchi) olvadáspontmérő készüléken határoztuk meg. Az optikai forgatóképességet Perkin-Elmer 141 típusú polariméteren mértük. A vékonyréteg-kromatogrammokaf Stal szerint készített Kieselgel G (E. Merck) szilikagél-rétegen készítettük. A kromatogrammok kifejlesztésére a következő oldószerelegyeket használtuk: 1. kloroform-metanol 9:1 2. etilacetát: (piridin:ecetsav:víz=20:6:ll) 95:5 3. etilacetát: (piridin:ecetsav:víz=20:6:ll) 9:1 4. etilacetát: (piridin:ecetsav:víz=20:6:ll) 8:2 5. etilacetát: (piridin:ecetsav:víz=20:6:11) 3:2 6. etilacetát: (piridin:ecetsav:víz=20:6:ll) 2:3 A vékonyréteg-kromatogrammok előhívására ninhidrin-oldatot használtunk, a permetezést követően körülbelül 5 percig 105 °C-on szárítottuk a lemezeket. Ez követően a kromatogrammokat klórgázba helyeztük, majd szellőztetés után o-tolidin-káliumjodid-oldattal hívtuk elő. Az anyagok oszlopkromatográfiás tisztításához 0,062—0,2 mm szemcseméret-tartományú Kieselgel G szilikagélt használtunk. Az oldatok vákuumbepárlását Rotavapor ,,R” (Büchi) típusú vákuumbepárlón végeztük, 50°C-t meg nem haladó hőmérsékleten. A BOC-védett aminosavak pentafluorfenil-észtereinek előállítása Kisfaludy L. és munkatársai (Ann. 1973, 1421) szerint történt. 1. példa L-Piroglutamil -L-leucil -L-pipekolinsav-amid 1. lépés L-Leucü-L-pipekolinsav-amid-hidroklorid 1,54 g (12 mmól) H-Pip-NH2-t 20 ml DMFA- ban szuszpendálunk és a szuszpenzióhoz, keverés közben 5,16 g (13 mmól) BOC-Leu-OPFP-t és 1,68 ml (12 mmól) trietilamint adunk. 6 óra keverés után a kapott oldatot vákuumban bepároljuk és a maradék olajat 60 ml kloroformban feloldjuk. Az oldathoz 0,2 ml 2-(dimetilamino)etilamint adunk, majd 5 perc állás után háromszor 20 ml n-sósav-oldattal háromszor 20 ml n nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és egyszer 20 ml vízzel kirázzuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk. Az olajos maradékot feloldjuk 3 ml etilacetátban és az oldathoz 10 ml 5 n-sósavas etilacetátot öntünk. 1 órai állás után a reakcióelegyet éterrel hígítjuk, a csapadékot kiszűrjük és vákuumban, vízmentes nátrium-hidroxid felett szárítjuk, [gy 3,13 g (H-Pip-NH2-ra számítva 94%) H-Leu-Pip-NH2. HCl-ot kapunk R| =0,46. 2. lépés Benzïloxikarbonil-L-piroglutamïl-L-leucïl-L-pipekolinsav-amid 3,13 g (11,2 mmól) H-Leu-Pip-NH2. HCl-ot és 4,94 g (11,5 mmól) Z-Glp-OPFP-t feloldunk 35 ml DMFA-ban és az oldathoz 1,57 ml (11,2 mmól) trietilamint adunk. 5 perc keverés után a reakcióelegyhez újabb 1,57 ml (11,2 mmól) ‘rietilamint adunk, majd további 20 perc keverés után vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékot feloldjuk 90 ml kloroformban, és az oldatot kétszer 30 ml n-sósav-oldattal. háromszor 30 ml n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és egyszer 30 ml vízzel kirázzuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, majd bepároljuk. Az amorf maradékot hideg éterrel elkeverjük és az éter leöntése után kapott olajat n-hexán alatt megszilárdítjuk. A 4,7 g amorf nyers terméket etilacetát-éter elegyből kristályosítjuk, így 3,32 g (61%) Z-Glp-Leu-Pip-NH2-t kapunk, olvadáspont: 143 144 °C, R* =0,51, [a]^5 = —97,2° (c=l, ecetsavban). Elemzési eredmények a C25H34OGN4 összegképlet (molekulasúly: 486,57) alapján: seámított: C 61,71%, H 7,04%, N 11,51%; talált: C 61,67%, H 7,05%, N 11,40%. 3. lépés L-Piroglutamil-L -leucil-L-pipekolinsav-amid 2,1 g (4,32 mmól) Z-Glp-Leu-Pip-NH2-ot feloldunk 40 ml metanolban. Az oldathoz 0,2 g 10% -os csontszenes palládium-katalizátort adunk, és 1 óra hosszat hidrogént buborékoltatunk át rajta. A katalizátor kiszűrése után a szűrletet bepároljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük. Az 1,48 g nyers terméket 20 ml vízben oldva derítjük, a víztiszta szűrletben feloldunk 4 g NaClot, és az oldatot 10—10 ml kloroformmal háromszor kirázzuk. A kloroformos oldatot vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, bepároljuk és az amorf maradékot etilacetát-éter elegygyel eldörzsöljük. Így 1,33 g (87,5%) Glp-Leu- Pip-NH2-ot kapunk, Rj =0,60 [a] d =—86,4° (c=l, ecetsavban). 2. példa L-PiroglutamU-L-leucü-L-tiazolidin-4-karbonsav-amid 1. lépés L-Leucü-L-tiazolidin-4-karbonsav-amidhidroklorid 1,81 g (11 mmól) H-Tca-NH2HCl-ot [S. Ratner, H. T. Clarke, J. Am. Chem. Soc. 59, 200 (1937.)] szuszpendálunk 30 ml DMFA-ban és a szuszpenzióhoz 3,97 g (10 mmól) BOC-Leu- OPFP-t, 1,49 g (11 mmól) 1-hidroxi-benztriazolt és 1,22 ml (11 mmól) N-metil-morfolint adunk. A keletkezett oldatot éjszaka szobahőmérsék-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
