180926. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a központi idegrendszerre ható, új TRH-analóg tripeptid-amidok előállítására
9 180926 10 létén állni hagyjuk, majd vákuumban bepároljuk és a maradékot feloldjuk 80 ml kloroformban. Az oldatot háromszor 20 ml n sósav-oldattal, háromszor 20 ml n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és egyszer 10 ml vízzel kirázzuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, vákuumban bepároljuk. A felhabzó, amorf, maradékot feloldjuk 5 ml etilacetátban és az oldathoz 10 ml 7 n sósavas etilacetátot öntünk. A reakcíóelegyet 1 óra állás után éterrel hígítjuk, a csapadékot kiszűrjük, vákuumban, vízmentes nátrium-hidroxid felett szárítjuk. így 1,84 g (BOCLeu-OPFP-re számítva 65%) H-Leu-Tca-NH2. HCl-ot kapunk, Rf5 —0,25, olvadáspont: 170—174° (bomlik). 2. lépés Benziloxikarbonü-L-piroglutamil-L-leucil- L-tiazolidin-4- karbonsav-amid 1,69 g (6 mmól) H-Leu-Tca-NH2. HCl-ot szuszpendálunk 20 ml DMFA-ban és a szuszpenzióhoz 2,7 g (6,3 mmól) Z-Glp-OPFP-t és 0,84 ml (6 mmól) trietil-amint adunk. A reakcióelegyet 20 perc keverés után vákuumban bepároljuk, a bepárlási maradékot 50 ml kloroformban feloldjuk és az oldatot kétszer 10 ml n sósav-oldattal, háromszor 10 ml n nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal és egyszer 10 ml vízzel kirázzuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, végül bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük és a 2,4 g nyers terméket etilacetát-éter elegyből többször átcsapva tisztítjuk. így 1,64 g (56%) Z-Glp-Leu-Tca-NH-j-ot kapunk, olvadáspont: 108—110 °C, Rf =0,46, [a]n =—130,30° (c=l, ecetsavban). 3. lépés L-Piroglutamil-L-leucil-L-tiazolidin-4-karbonsav-amid 1,62 g (3,3 mmól) Z-Glp-Leu-Tca-NH2-ot feloldunk 6 ml jéghideg 3,5 n jégecetes hidrogénbromidban, és az oldatot 0— 5°C-on másfél órán át állni hagyjuk. Ezután a reakcióelegyet éterrel hígítva dekantáljuk a visszamaradt olajat 20 ml vízben feloldjuk és az oldatot szilárd nátrium-hidrogén-karbonáttal semlegesítjük, majd háromszor 10 ml éterrel kirázzuk. A vizes oldatot vákuumban bepároljuk, a maradékot felvesszük 20 ml kloroformban, majd vízmentes nátrium-szulfáttal történő szárítás után a kloroformos oldatot bepároljuk és az amorf maradékot éterrel eldörzsöljük. Az 1,13 g nyers terméket a 4. futtatóelegyben oldva, 20 g szilikagélből készített oszlopra visszük és a fenti oldószereleggyel eluáljuk. A tiszta terméket tartalmazó frakciókból 0,78 g amorf anyagot izolálunk, amelyet 20 ml vízben oldva derítünk, majd a víztiszta oldatot liofilizáljuk. így 0,62 g (53%) Glp-Leu-Tca-NH2-ot kapunk, Rf =0,53, [a] ^ =—145,0° (c=l, ecetsavban). 3. példa L-Piroglutamil-L-leucil-D-prolin-amid 1. lépés Benziloxikarbonil-L-piroglutamil-L-leucil-D-prolin-amid 1,54 g (5,8 mmól) H-Leu-D-Pro-NH2. HCl-ot feloldunk 20 ml DMFA-ban és az oldathoz 0,81 ml (5,8 mmól) trietilamint és 2,58 g (6 mmól) Z-Glp-OPFP-t adunk. A reakcióelegyhez 5 perc keverés után újabb 0,81 ml (5,8 mmól) trietilamint adunk, majd további 10 perc keverés után vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékot feloldjuk 60 ml kloroformban és az oldatot háromszor 15 ml n sósav-oldattal, háromszor 15 min nátrium- hidrogén-karbonát-oldattal és egyszer 15 ml vízzel kirázzuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk. Az amorf maradékot éterrel eldörzsöljük. A 2,1 g nyers terméket 5 ml etilacetátból átkristályosítjuk, s így 1,8 g (66%) Z-Glp-Leu-D-Pro-NH2- ot kapunk, olvadáspont: 153—157 °C, Rf =0,38 [a]£5 =—24,5° (c=l, ecetsavban). 2. lépés L-Firoglutamil-L-leucil-D-prolin-amid 1,5 g (3,25 mmól) Z-Glp-Leu-D-Pro-NH2-ot feloldunk 70 ml metanolban, az oldathoz 0,3 g 10%-os csontszenes palládium-katalizátort adunk és 1 órán keresztül hidrogéngázt buborékoltatunk át rajta. A katalizátor kiszűrése után a szűrletet bepároljuk és az amorf maradékot éterrel eldörzsöljük. A 0,94 g nyers terméket vízben oldva derítjük és a víztiszta szűrlet.et liofilizáljuk. így 0,87 g (79%) Glp-Leu-DPro-NH2-ot kapunk, R* =0,47, [a]£5 =+8,4° (c=l, ecetsavban). 4. példa L-Piroglutamatil-L-norvalil-L-tiazolidin-4-karbonsav-amid 1. lépés L-Norvalü-L-tiazolidin-4-karbonsav-amidhidroklorid 8,0 g (20 mmól) BOC-Nva-OH. DCHA-t 60 ml éterben szuszpendálunk és a szuszpenziót 20 ml 2 n kénsavval oldódásig rázzuk. Elválasztás után az éteres oldatot még egyszer 20 ml 2 n kénsavval és egyszer 20 ml vízzel kirázzuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, majd bepároljuk. A maradék olajat feloldjuk 40 ml DMFA-ban, az oldathoz 2,8 ml (20 mmól) trietilamint adunk, —15 °C-ra hűtjük és keverés közben 2,5 ml (20 mmól) pivaloil-kloridot csepegtetünk hozzá, olyan ütemben, hogy a reakcióelegy hőmérséklete —5 °C alatt maradjon. A keletkezett szuszpenziót ezután 10 percig keverjük ezen a hőmérsékleten. Eközben 3,72 g (22 mmól) H-Tca-NH2-HC 1 30 ml-es DMFA-os szuszpenzióját 3,1 ml (22 mmól) trietilaminnal kezeljük, s a csapadék kiszűrése után a szűrletet a fenti vegyes-anhidrid oldatához csepegtetjük, —5 °C alatti hőmérsékleten, Becsepegtetés után a reakcióelegyet még 30 percig —10 °C-on keverjük, majd éjszaka hűtőszekrényben állni hagyjuk, ezután vákuumban bepároljuk. A be-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
