180925. lajstromszámú szabadalom • Eljárás központi idegrendszerre ható TRH-analóg tripeptid-amidok előállítására
11 180 925 12 NH2-ot kapunk, R4f = 0,36, [a] a =—87,0 °C (c = 1, ecetsavban), aminosav-analízis: Glu 0,97 (1,0); Nva 1,09 (1,0); Pro 1,00 (1,0). 4. példa L-Piroglutamil-L-prolil-L-prolin-amid 1. lépés L-Prolil-L-prolin-amid-hidroklorid 2,28 g (20 mmól) H-Pro-NH2-ot és 3,81 g (10 mmól) BOC-Pro-OPFP-t feloldunk 40 ml DMFA-ban, és az oldatot háromszor 10 ml n sósav-oldattal háromszor 10 ml n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és egyszer 10 ml vízzel kirázzuk, majd vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk. A kloroformos oldatot bepároljuk, a maradékot 5 ml etilacetátban feloldjuk, és 10 ml 5 n sósavas etilacetátot öntünk hozzá. 30 perc elteltével a reakcióelegyet éterrel hígítjuk, a csapadékot kiszűrjük és vákuumban, vízmentes nátrium-hidroxid felett szárítjuk. így 2,06 g (BOC-Pro-OPFP-re számítva 83%) H-Pro-Pro- NH2• HCl-ot kapunk. R^j = 0,05. 2. lépés Benziloxikarbonil-L-piroglutamil-L-proIil-L-prolin-amid 0,75 g (3 mmól) H-Pro-Pro-NH2 ■ HCl-ot 10 ml DMFA-ban szuszpendálunk, és a szuszpenzióhoz, jeges hűtés és keverés közben, 0,42 ml (3 mmól) trietilamint és 1,35 g (3,15 mmól) Z-Glp-OPFP-t adunk. 5 perc után a reakcióelegyhez újabb 0,42 ml (3 mmól) trietilamint adunk, majd további 10 perc keverés után a keletkezett sűrű szuszpenziót vákuumban bepároljuk, és a kristályos maradékot 8 ml etanollal eldörzsölve 3 óra hosszat hűtőszekrényben tartjuk. Ezután a csapadékot kiszűrjük, s így 1,0 g (73%) Z-Glp- Pro-Pro-NH2-ot kapunk, olvadáspont: 247— 248 °C (bomlik), Rf = 0,19 [a]g = —82,8° (c = 1, ecetsavban). Elemzési eredmények a O^sH^OgN/; összegképlet (molekulasúly; 456,50) alapján: számított: C 60,52%, H 6,18%, N 12,27%; talált: C 60,03%, H 6,20%, N 12,20%. 3. lépés L-Piroglutamil-L-prolil-L-prolin-amid 1,0 g (2,2 mmól) Z-Glp-Pro-Pro-NHo-ot feloldunk 50 ml ecetsavban. Az oldathoz 0,2 g 10%os csontszenes palládium-katalizátort adunk, és 1 óra hosszat hidrogéngázt buborékoltatunk át rajta. A katalizátor kiszűrése után a szürletet bepároljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük. A 0,60 g, amorf nyers terméket vízben feloldva derítjük, és a víztiszta oldatot liofilizáljuk. így 0,50 g (70%) Glp-Pro-Pro-NH2-ot kapunk, R| = 0,10, [a]gj = —223,1° (c = 1. ecetsavban). 5. példa L-Piroglutamil-L-valil-L-prolin-amid 1. lépés L-Valil-L-prolin-amid-hidroklorid 0,49 g (4,28 mmól) H-Pro-NH2-ot és 0,82 g (2,14 mmól) BOC-Val-OPFP-t feloldunk 10 ml DMFA-ban, és az oldatot 30 perc állás után vákuumban bepároljuk. A maradék olajat 10 ml kloroformban feloldjuk, és az oldatot kétszer 3 ml n sósav-oldattal, háromszor 3 ml n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és egyszer 3 ml vízzel kirázzuk, majd vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk. A kloroformos oldatot bepároljuk, a maradékot 3 ml etilacetátban feloldjuk, és 3 ml 5 n sósavas etilacetátot öntünk hozzá. 1 óra állás után a reakcióelegyet éterrel hígítjuk, a csapadékot kiszűrjük, és vákuumban, vízmentes nátrium-hidroxid felett szárítjuk. így 0,51 g (BOC-Val-OPFP-re számítva 95%) H-Val- Pro-NH2-HCl-ot kapunk, R* = 0,10. 2. lépés Benziloxikarbonil-L-piroglutamil-L-valil-L-prolin-amid 0,38 g (1,52 mmól) H-Val-Pro-NH2 • HCl-ot 10 ml DMFA-ban szuszpendálunk, és a szuszpenzióhoz jeges hűtés és keverés közben 0,22 ml (1,52 mmól) trietilamint és 0,69 g (1.6 mmól) Z-Glp-OPFP-t adunk. 10 perc után a ' 'eakcióelegyhez újabb 0,22 ml (1,52 mmól) trietilamint adunk, majd további 30 perc keverés után vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékot 15 ml kloroformban feloldjuk, és az oldatot kétszer 5 ml n sósav-oldattal, háromszor 5 ml n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és egyszer 5 ml vízzel kirázzuk. A kloroformos oldatot vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. Az olajszerű maradékot éterrel kristályosítjuk, s így 0,54 g (77%) Z-Glp- Val-Pro-NH2-t kapunk, olvadáspont: 116-118 °C, R3 = 0,30, [ajjrj = —100,5° (c = 1, ecetsavban). Elemzési eredmények a C23 H30O6N4 összegképlet (molekulasúly: 458,52) alapján: számított: C 60,25%, H 6,59%, N 12,22%; talált: C 59,23%, H 6,76%, N 11,71%. 3. lépés L-Piroglutamil-L-valil-L-prolin-amid 9,65 g (21,2 mmól) Z-Glp-Val-Pro-NH2-ot 300 ml vízben feloldunk, és 2 g 10%-os csontszenes palládium-katalizátor hozzáadásával az oldaton 5 órán keresztül hidrogéngázt buborékoltatunk át. A katalizátor kiszűrése után a szürletet bepároljuk, és a maradék olajat etanolban feloldjuk, majd az oldatot újra bepároljuk. Ezt a műveletet még kétszer megismételjük, végül az amorf, szilárd maradékot éterrel eldörzsöljük. Így 4,47 g (65%) GIp-Val-Pro-NH2-ot kapunk, R4 = 0,34, [ct]ü = —104,9° (c = 1, ecetsavban), aminosav-analízis: Glu 1,03 (1,01); Val 1,00 (1,0); Pro 0,94 (1,0). 6. példa L-Piroglutamil-L-izoleucil-L-prolin-amid 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
