180925. lajstromszámú szabadalom • Eljárás központi idegrendszerre ható TRH-analóg tripeptid-amidok előállítására
13 180 925 14 1. lépés Benziloxikarbonil-L-izoIeucil-L-prolin-amid 51,4 g (0,1 mól) Z-Ile-OPCP-t és 12,5 g (0,11 mól) H-Pro-NH2-ot feloldunk 250 ml DMFA- ban, és az oldathoz 14,0 ml (0,1 mól) trietilamint adunk. A reakcióelegyet éjszaka állni hagyjuk, majd vákuumban bepároljuk. A maradék olajat 500 ml kloroformban feloldjuk, és az oldatot kétszer 100 ml n sósav-oldattal, kétszer 100 ml n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és egyszer 100 ml vízzel kirázzuk. A kloroformos oldatot vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, bepároljuk és az olajos maradékot 100 ml éter és 100 ml n-hexán elegyével kristályosítjuk. A 31,7 g nyers terméket 60 ml etilacetát és 60 ml nhexán elegyéből átkristályosítjuk. Így 30,32 g (84%) Z-Ile-Pro-NH2-ot kapunk, olvadáspont: 127—128 °C, R| = 0,54. 2. lépés L-Izoleucil-L-prolin-amid-hidroklorid 24,0 g (66,5 mmól) Z-Ile-Pro-NH2-ot feloldunk 470 ml metanolban, és az oldathoz 30 ml 2,4 n sósavas metanolt és 4 g 10%-os csontszenes palládium-katalizátort adunk. Ezután a reakcióelegyben 1 órán keresztül hidrogéngázt buborékoltatunk át, majd a katalizátort kiszűrjük, és a szürletet bepároljuk. A bepárlási maradékot éterrel eldörzsölve 20 g nyers terméket kapunk, amelyet metanol-éter elegyből átkristályosítunk. A kapott H-Ile-Pro-NH2 • HC1 súlya 16,05 g (81%), olvadáspont: 135—140 °C, R< = 0,15. 3. lépés Benziloxikarbonil-L-piroglutamil-L-izoleucil-L-prolin-amid 0,90 g (3,5 mmól) H-Ile-Pro-NH2 • HCl-ot 20 ml DMFA-ban szuszpendálunk. A szuszpenzióhoz, jeges hűtés és keverés közben 0,49 ml (3,5 mmól) trietilamint és 1,57 g (3,7 mmól) Z-Glp- OPFP-t adunk. 5 perc után a reakcióelegyhez újabb 0,49 ml (3,5 mmól) trietilamint adunk, majd további 20 perc keverés után vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékot feloldjuk 30 ml kloroformban és az oldatot kirázzuk háromszor 7 ml n sósav-oldattal, háromszor 7 ml n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és egyszer 7 ml vízzel. A kloroformos oldatot vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk. A maradék olajat többszöri éteres dekantálás után éter alatt kristályosítjuk, majd a nyers terméket etilacetátban oldjuk, és az oldatból éterrel kicsapjuk. így 1,18 g (71,5%) Z-Glp-Ile-Pro- NH2-ot kapunk, olvadáspont: 87—89 °C, Rf = 0,36, [a] g = —91,4° (c = 1, ecetsavban). Elemzési eredmények a C2/JH,'j206N/1 összegképlet (molekulasúly: 472,55) alapján: számított: C 61,00%, H 6,83%, N 11,86%,; talált: C 59,19%, H 6,88%, N 11,16%. 4 4. lépés L-Piroglutamil-L-izoleucil-L-prolin-amid 4,72 g (10 mmól) Z-Glp-Ile-Pro-NH2-ot 100 ml metanolban feloldunk, és az oldaton, 1 g 10%os csontszenes palládium-katalizátor hozzáadásával, 1 óra hosszat hidrogéngázt buborékoltatunk át. A katalizátor kiszűrése után a szürletet bepároljuk, és a maradékot éterrel eldörzsöljük. A 3,22 g amorf nyers terméket vízben oldva megderítjük, és a víztiszta oldatot liofilizáljuk. Így 3,03 g (89%) Glp-Ile-Pro-NH2-ot kapunk, Rf — 0,45, [a] & — —100,7° (c = 1, ecetsavban), aminosav-analízis : Glu 0,95 (1,0); Ile 1,00 (1,0); Pro 1,02 (1,0). 7. példa L-Piroglutamil-L-a-aminobutiril-L-prolinamid 1. lépés terc-Butiloxikarbonil-L-a-amino-vajsavpentafluorfenilészter 7,7 g (20 mmól) BOC-Abu-OH.DCHA-t 60 ml éterben szuszpendálunk, és a szuszpenziót 20 ml 2 N kénsavval oldódásig rázzuk. Elválasztás után az éteres oldatot 20 ml 2 N kénsavval és 20 ml vízzel kirázzuk, szárítás után bepároljuk. A maradék 4,14 g olajat és 3,7 g (20 mmól) PFPOH-t 25 ml etilacetátban feloldjuk, az oldatot 5 °C alá hűtjük és keverés közben 3,92 g (19 mmól) DCC-t adunk hozzá. A reakcióelegyet 1 óra hosszat jeges fürdőben keverjük, majd a DCU-t kiszűrjük, a szürletet bepároljuk, és a maradék olajat 50 ml n-hexánban feloldva 1 órára hűtőszekrénybe helyezzük. Ezután a kivált DCU-t kiszűrjük, a szürletet 20 ml-re bepároljuk. Kezdődő kristálykiválás után a szuszpenziót éjszaka hűtőszekrényben állni hagyjuk, majd a kristályokat kiszűrjük. Így 5,57 g (76%) BOC-Abu-OPFP-t kapunk, olvadáspont: 83— 84 °C, RÍ = 0,86, [a]“ = —32,8° (c = 1, etilacetátban). Elemzési eredmények a C15H16O4NF5 összegképlet (molekulasúly: 369,29) alapján: számított: C 48,79%, H 4,37%, N 3,79%, F 25,72%; talált: C 48,55%, H 4,28%, N 3,70%, F 25,44%. 2. lépés L-a-Amino-butiril-L-prolin-amid-hidroklorid 3,2 g (28 mmól) H-Pro-NH2-ot és 5,16 g (14 mmól) BOC-Abu-OPFP-t feloldunk 60 ml DMFA-ban, és az oldatot 5 perc állás után vákuumban bepároljuk. A maradék olajat 100 ml kloroformban feloldjuk és az oldatot kétszer 20 ml n sósav-oldattal és kétszer 20 ml n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal kirázzuk, majd vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk. A kloroformos oldatot bepároljuk, a maradék olajat 20 ml etilacetátban feloldjuk, és 20 ml 6 n sósavas etilacetátot öntünk hozzá. 1 óra elteltével a reakcióelegyet éterrel hígítjuk, a csapadékot kiszűrjük, és vákuumban, vízmentes nátriumhidroxid felett szárítjuk. A 3,86 g nyers terméket 20 ml DMFA-dal hidegen trituráljuk. Így 2,40 g (BOC-Abu-OPFP-re számítva 73%) HAbu-Pro-NHí • HCl-ot kapunk, R‘ = 0,10, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
