180925. lajstromszámú szabadalom • Eljárás központi idegrendszerre ható TRH-analóg tripeptid-amidok előállítására
5 180 925 6 TRH-ra vonatkozó %-ban adjuk meg. Kísérleteinkhez anyagonként tizenöt 18—22 g-os CFLP (LATI) hím egeret használtunk. 3. Rezerpin hipotermia-megfordító hatás egéren [B. M. Askew: Life Sei. 2, 725—730 (1963] 5 mg/kg i. p. rezerpin után 16 órával kezeltük az állatokat TRH, illetve analógjai 20 mg/kgos i. p. dózisával. Az állatok rektális hőmérsékletét rezerpinkezelés előtt (norm), rezerpin kezelés után 16 órával (réz) és az anyagok adása után 2 órán át (kezelés után) óránként mértük Ellab hőmérővel. A táblázaton az állatok átlagos hőmérsékletét tüntettük fel. Csoportonként tíz—tíz 18—22 g-os CFLP (LATI) hím egeret használtunk. 4. Hexobarbital-alvásidő 60 mg/kg hexobarbital-Na (EvipanR Bayer) intravénás beadása után 10 perccel kezeltük az állatokat intraperitoneálisan TRH és analógjai 20 mg/kg dózisával. Az alvásidő-változást a hexobarbital-alvásidő %-ában tüntettük fel. Anyagonként 10—10 hím egeret használtunk. 5. Etanol-narkózis [J- M. Cott etc.: J. Pharmacol. Exp. Ther. 196, 594 (1976)] 4,5 g i. p. etilalkohol után 10 perccel kezeltük az állatokat a vizsgálati anyagok 20 mg/kg-os intraperitoneális dózisaival. Anyagonként húsz vegyesivarú 18—22 g-os CFLP (LATI) egeret 5 használtunk. 6. Hormon-aktivitás mérése (TSH-hatás) patkányokon A TRH-ra és az analógokra adott TSH-választ az anyagok i. v. adása után 15 perccel határoz- 10 tűk meg plazmából radioimmun vizsgálattal. A relatív hatáserősséget 4 pontos módszerrel, TPA 101 számítógéppel számítottuk, a TRH hatását 100%-nak véve. Vizsgálatainkhoz 200 g-os Wistar eredetű (RG) 15 hím patkányokat használtunk (dózisonként 7—8 állatot). A találmány szerinti eljárással előállítható (I) általános képletű TRH-analógok, valamint egyes közbenső termékek és vegyületek újak; hasonló 20 ismert vegyület Glp-Leu-Pro-NH2 [vö.: H. Sievertsson és munkatársai, Acta Pharm. Suecica 10, 297 (1973)], amelynek azonban központi idegrendszeri hatását eddig nem vizsgálták. Az (I) általános képletű vegyületek fontosabb 25 képviselőinek biológiai hatásosságára vonatkozó adatokat az alábbi táblázatban foglaltuk öszsze. Hexo- Eta-Rezerpínes hipotermia barbital nolos L-DOPA lokomotoroF megfordítása, rekt. hóm. alvási alvási TSH-aktivitás pót. % °C idő idő hatás 30’ 60’ 90’ norm. réz. kezelés után a kont- a kontlh 2h roll roll %-ában %-ában Nva Pro H 11,4 120 254 156 214 36,2 25,9 36,4 32,0 114 77 0 Nleu Pro H 16,8 120 249 105 112 36,3 27,1 37,6 32,2 77 74 3,8 Leu Pro H 40 120 179 64 102 35,9 26,7 38,3 36,0 35 51 2,7 Leu Pro Et 56,6 30 102 90 201 36,2 28,7 30,7 33,4 126 65 0 His HPro H 13,7 120 209 85 110 36,5 28,5 35,3 35,4 63 114 68,6 Abu Pro H 80 15 27 14 18 36,3 19,7 22,2 25,4 84 39 0,02 TRH 80 15 100 100 100 36,2 25,9 35,5 30,2 56 35 100,0 (kontroll) Hexobarbital-alvásidő (X + SE): 38,4 + 1,36 perc Etanolos alvásidő (X+SE): 46,9+2,17 perc Glp-X-Y-NH-A X Y A Haloperidolkatalepszia gátlás ED50 idő (mg/kg) (perc) A táblázat adataiból látható, hogy a TRH-molekulában a His helyettesítése egyenes vagy elágazó szénláncot tartalmazó alifás aminosavval a TSH kiválasztás megszűntét, ill. jelentős csökkenését okozza, miközben például a haloperidol által kiváltott katalepszia gátlása 2—7-szerese a TRH-molekuláénak. Ugyancsak jelentős néhány TRH-analóg lokomotoros aktivitást potencírozó hatása is. Egyes analógok mind a hexobarbitál, mind az etanolos alvási időt jelentősen csökkentik. Figyelemre méltó, hogy a His-t tartalmazó TRH-analóg a hormonhatás mintegy 70%-os megtartása mellett jelentős központi idegrendszeri hatásokkal bír. A találmány szerint előállítható peptideket a szokásos gyógyszerkészítmények alakjában használhatjuk fel a gyógyászatban- Az ilyen gyógyszerkészítmények a találmány szerinti vegyületeket enterális vagy parenterális beadásra alkalmas szervetlen vagy szerves vivőanyag kíséretében tartalmazzák. A gyógyszerkészítmények lehetnek szilárd liofilizátumok, amelyekhez vivőanyagként peptidekkel nem reagáló vegyületeket, például szénhidrátokat alkalmazunk, lehetnek, továbbá híg vagy tömény szuszpenziók, vagy emulziók, de lehetnek tabletták vagy injekciók is, a szokásos kiszerelési formákban. A találmány szerinti eljárás foganatosítási módjait közelebbről az alábbi példákkal szemléltetjük. A példákban alkalmazott rövidítések a kémiai irodalomban használt rövidítéseknek felelnek meg [J. Biol. Chem. 247, 977 (1972)]. További rövidítések : Ada L-2-amino-dekánsav Abu L-2-amino-va j sav Cha L-ciklohexilalanin Pip L-pipekolinsav HPro L-homoprolin Glp L-piroglutaminsav DAE 2-dimetilamino-etil DCC diciklohexil-karbodiimid DCU diciklohexil-karbamid 45 50 55 60 65 3
