180925. lajstromszámú szabadalom • Eljárás központi idegrendszerre ható TRH-analóg tripeptid-amidok előállítására
7 180 925 8 PFPOH pentafluorfenol DMFA dimetilformamid A vegyületek olvadáspontját dr. Tottoli-féle (Büchi) olvadáspontmérő készüléken határoztuk meg. Az optikai forgatóképességet Perkin—Elmer 141 típusú polariméteren mértük. A vékonyréteg-kromatogramokat Stahl szerint készített, Kieselgel G márkanevű szilikagél-rétegen készítettük. A kromatogramok kifejlesztésére a következő oldószerelegyeket használtuk: 1. kloroform:metanol 9:1 2. etilacetát: (piridin:ecetsav:víz=20:6:ll) 9:1 3. etilacetát: (piridin:ecetsav:víz=20:6:ll) 8:2 4. etilacetát: (piridin:ecetsav:víz=20:6:ll) 3:2 A vékonyréteg kromatogramok előhívására ninhidrin-oldatot használtunk, a permetezést követően körülbelül 5 percig 105 °C-on szárítottuk a lemezeket. Ezt követően a kromatogrammokat klórgázba helyeztük, majd szellőztetés után o-tolidin-káliumjodid-oldattal hívtuk elő. Az anyagok oszlopkromatográfiás tisztításához 0,062—0,2 mm szemcseméret-tartományú Kieselgel G szilikagélt használtunk. Az oldatok vákuumbepárlását Rotavapor ,,R” (Büchi) típusú vákuumbepárlón végeztük, 50 °C- ot meg nem haladó hőmérsékleten. A BOC-védett aminosavak pentafluorfenil-észtereinek előállítása Kisfaludy L. és munkatársai (Ann. 1973, 1421) szerint történt. Az 1. példa szerinti vegyület előállítási eljárása nem képezi a találmány tárgyát. 1. példa L-Piroglutamil-L-leucil-L-proIin-amid 1. lépés L-Leucil-L-prolin-amid-hidroklorid 7,94 g (20 mmól) BOC-Leu-OPFP-t és 4,56 g (40 mmól) H-Pro-NEL-ot 80 ml dimetilformamidban feloldunk. Az oldatot 5 perc állás után vákuumban bepároljuk, a bepárlási maradékot feloldjuk 150 ml kloroformban, és az oldatot háromszor 40 ml n sósav-oldattal háromszor 40 ml nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül egyszer 40 ml vízzel kirázzuk. Vízmentes nátrium-szulfáttal való szárítás után a kloroformos oldatot vákuumban bepároljuk, az olajszerű maradékot 10 ml etilacetátban feloldjuk, és az oldathoz 10 ml 5 N sósavas etilacetátot öntünk. 1 órai állás után a reakcióelegyet 100 ml etilacetáttal hígítjuk, és a kapott csapadékot kiszűrjük, a szűrőn etilacetáttal mossuk, majd vákuumban, vízmentes nátrium-hidroxid felett megszárítjuk, így 4,82 g (BOC-Leu-OPFP-re számítva 91%) H-Leu-Pro-NH2-HCl-ot kapunk. R* = 0,20. 2. lépés Benziloxikarbonil-L-piroglutanminsav-penta-fluor-fenilészter 2,63 g (10 mmól) benziloxikarbonil-L-piroglutaminsavat és 2,02 g (11 mmól) PFPOH-t feloldunk 30 ml etilacetátban. Az oldatot 5 °C-ra hűtjük, és 2,24 g (11 mmól) DCC-t adunk hozzá. A reakcióelegyet 1 óra hosszat keverjük jeges hűtés mellett, majd a DCU-t kiszűrjük, és a szürletet vákuumban bepároljuk. A maradék olajat n-hexán alatt kristályosítjuk, a kristályokat kiszűrjük. Az így kapott, 4,27 g nyers terméket 10 ml etilacetátban oldva 1 órára hűtőszekrénybe helyezzük, majd a kivált DCU-t újra kiszűrjük. A szürlet bepárlása után nyert olajos maradékot 3 ml etilacetátban melegen feloldjuk, és az oldatból a terméket 20 ml nhexánnal kicsapjuk. A szuszpenziót éjszaka hűtőszekrényben tartjuk, majd a csapadékot kiszűrjük. így 3,86 g (90%) Z-Glp-OPFP-t kapunk, olvadáspont: 80-82 °C, Rf = 0,84, [a]D = —40,4° (c = 1, etilacetátban). Elemzési eredmények a C19H12O5NF5 összegképlet (molekulasúly: 429,30) alapján: számított: C 53,16%, H 2,82%, N 3,26%, F 22,13%; talált: C 52,95%, H 2,93%, N 3,24%, F 21,78%. 3. lépés Benziloxikarbonil-L-piroglutamil-L-leucil-L-prolin-amid 0,53 g (2 mmól) H-Leu-Pro-NEL - HCl-ot 10 ml DMFA-ban szuszpendálunk, és a szuszpenzióhoz, jeges hűtés és keverés közben, 0,28 ml (2 mmól) trietilamint és 0,9 g (2,1 mmól) Z-Glp- OPFP-t (1. példa, 2. lépés) adunk. 5 perc keverés után a reakcióelegyhez újabb 0,28 ml (2 mmól) trietilamint adunk, majd további 20 perc keverés után vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékot feloldjuk 20 ml kloroformban, és az oldatot háromszor 5 ml n sósav-oldattal, majd háromszor 5 ml n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és egyszer 5 ml vízzel kirázzuk. A kirázott kloroformos oldatot vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk, vákuumban bepároljuk és a maradékot éterrel kristályosítjuk. Néhány órás hűtés után a nyers terméket kiszűrjük (0,75 g), majd 1 ml etanolban melegen feloldjuk és az oldatból a terméket 10 ml éterrel kicsapjuk. Így 0,70 g (74%) Z-GLP-Leu-Pro- NH2-t kapunk. Olvadáspont: 103—105 °C, Rf =0,30, [a] D = —93,3° (c = 1, ecetsavban). Elemzési eredmények a C-i/.H^OßN,, összegképlet (molekulasúly: 472,55) alapján: számított: C 61,00%, H 6,83%, N 11,86%; talált: C 60,32%, H 6,92%, N 11,54%. 4. lépés L-Piroglutamil-L-leucil-prolin-amid 1,5 g (3,18 mmól) Z-Glp-Leu-Pro-NH2-ot feloldunk 30 ml metanolban és az oldaton 0,1 g 10%-os csontszenes palládium-katalizátor hozzáadásával, fél órán keresztül hidrogéngázt buborékoltatunk át. A katalizátor kiszűrése után a szürletet bepároljuk és a maradék, felhabzó olajat éter alatt eldörzsöljük. így 1,0 g (93%) amorf Glp-Leu-Pro-NH2-t kapunk, Rf = 0,43, [a] o = —91,6° (c = 1, ecetsavban), aminosav-analízis: Glu 1,02 (1,0), Leu 1,00 (1,0), Pro 1,00 (1,0). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
