180898. lajstromszámú szabadalom • Javított eljárás VIII. koagulációs faktort tartalmazó készítmény előállítására mélyhűtött emberi plazmából
5 6 « Sherman eljárásának egészen más a célja, mint a VIII. módon dolgozzuk fel, úgy, hogy alacsony hőmérsékleten 1808% koagulációs faktor előállítása, és ez utóbbihoz nem is ad közvetlen útmutatást. A szakember számára nem volt előrelátható, hogy egyáltalán lehetséges a vérplazma mikrohullámokkal történő felolvasztásának olyan szabályozása, hogy 5 hidegen képződött csapadékot kapjunk. Ugyanakkor a szakembernek arra kellett számítania, hogy a plazmának a felolvasztott része forrásig melegszik, tekintettel a víz (felolvasztott plazma) dielektromos állandója és a jég (még fagyott állapotú plazma) dielektromos állandója közötti nagy kü- 10 lönbségre. Az ilyen hatalmas hőmérsékletkülönbség eleve lehetetlenné teszi a hidegen képződött csapadék kialakításához szükséges szabályozott hőmérsékletfeltételek betarthatóságát. Shermannak szükségképpen lehetőleg gyorsan oldatba kell vinnie az összes faktort, és nem kell törődnie a 15 felolvasztás folyamán a plazmában fellépő hőmérsékletkülönbségekkel. A szakember számára különösen az meglepő, hogy lehetséges a könnyen oldható, hidegen képződött csapadék jó kitermeléssel történő elkülönítése. 20 Az 1. igénypontban megadott 10 °C hőmérséklet a hidegen képződött csapadék eltarthatóságának gyakorlati felső határa, mivel magasabb hőmérsékleten a csapadék oldatba megy. Előnyös hőmérséklettartomány az 1—6 °C, s célszerűen 25 ügyelünk arra, hogy a besugárzás folyamán a hőmérséklet soha ne lépje túl a 4 °C-ot. Ha ezen a hőmérsékleten dolgozunk, elérjük, hogy a hidegen képződött csapadék eléggé kevéssé oldódjon, és a teljes besugárzási idő körülbelül 4—5 percre korlátozódjon. 30 Az elektromágneses hullámokkal történő kezelés megkönnyítésére előnyösen előmelegítést alkalmazhatunk, például 0 °C-ra, úgy, hogy a megfagyasztott plazmát tartalmazó zacskót elegendő ideig, például körülbelül fél órán át szobahőmérsékleten, hűtőszekrényben vagy vízfürdőben 35 tartjuk. Az előmelegítést úgy is elvégezhetjük, hogy a plazmát tartalmazó zacskót hosszabb vagy rövidebb ideig besugározzuk elektromágneses hullámokkal. Kívánt esetben ezt a besugárzást az egész felolvasztás alatt alkalmazhatjuk, azonos vagy különböző frekvenciájú elektromágneses hullá- 40 mok alkalmazásával. A mikrohullámokkal végzett felmelegítés történhet a kereskedelemből beszerezhető mikrohullámú kemencében (ilyen például a Husquarna Modell 105), amely például 2450 MHz frekvenciájú mikrohullámokat ad le. Ez a sugár- 45 zás eléggé mélyen behatol az anyagba ahhoz, hogy a felolvasztás megfelelően rövid idő alatt bekövetkezzen. A döntő csupán az, hogy az egész besugárzást olyan módon végezzük, hogy az átlagos nagyfrekvenciás névleges teljesítmény eléggé csekély legyen, nehogy a hőmérséklet túllépje a 10 °C 50 értéket. A körülményektől függően történhet a besugárzás szakaszosan vagy folyamatosan. A célszerű melegítési idő egyébként függ az alkalmazott kemencetípustól, elsősorban annak névleges teljesítményétől, az elektromágneses sugárzás frekvenciájától, valamint a 55 mélyhűtött plazma részecskéinek alakjától, részecskeméretétől és kezdeti hőmérsékletétől, és kísérletekkel állapítható meg. Az elektromágneses sugárzás frekvenciája általában 108—2x 1011 Hz, előnyösen 2 x 109—3x 1010 Hz. A találmány szerint infravörös sugárzás is alkalmazható. Az ebből 60 a sugárzásból származó energia széles frekvenciaspektrumú, mintegy 1013 Hz és 1015 Hz közötti. Maximális értéke az általunk alkalmazott lámpánál 2,5 • 1014 Hz. A felolvasztás során kivált csapadékot — amelyet hidegen képződött csapadéknak neveztünk — önmagában ismert 65 (1—4 "Q centrifugáljuk és ismét feloldjuk fiziológiailag alkalmas puffer-oldatban, például 6,5 pH körüli értékű citrátglükóz puffer-oldatban. A hidegen képződött és ismételten feloldott csapadékot szűrjük és injekciós palackokba töltjük, célszerűen 500 egység VIII. koagulációs faktort tartalmazó mennyiségben, majd előnyösen fagyasztva szántásnak vetjük alá. A kész terméket felhasználás előtt teljesen feloldjuk 25 ml vízben, így az injekció otthon is beadható. A találmány szerint előállított készítményt összehasonlítottuk a kereskedelemből beszerezhető ismert készítményekkel az alábbi táblázatban. A táblázatból kitűnik, hogy a kitermelést és a felezési időt illetően a találmány szerint előállított készítmény összemérhető a legjobb ismert, közepes tisztaságú termékekkel. A találmány szerinti készítmény oldhatósága viszont közel háromszorosa az ismert, közepes tisztaságú termékeknek. Ha az összehasonlítást az ismert, nagy tisztaságú készítményekkel végezzük, kiderül, hogy a találmány szerinti készítmény oldhatósága azokéval összemérhető, kitermelése és felezési ideje pedig körülbelül háromszorosa a nagy tisztaságú készítményekének. Táblázat Termék Termelés, % Koncentráció2, egység/ml 500 egység oldásához szükséges térfogat, ml Felezési idő1, óra Hidegen képződött csapadék (közepes tisztaságú készítmények) 30—40 5—15 35—100 8—93 Nagy tisztaságú készítmények 10—20 20—40 15—25 4—53 Találmány szerint előállított készítmény 40—50 20 25 10—12 1 A „natív” állapotú vérzékenység elleni faktor felezési ideje N 12 óra. 2 1 egység = a vérzékenység elleni faktor mennyisége 1 ml friss, normális, emberi vérplazmában. 3 J. H. Smith, G. R. Miller és R. T. Beckenridge szerint, JAM A, 220, 1352 (1973). A találmányt az alábbi példák segítségével részletesen ismertetjük: 1. példa Kiindulási anyagként fagyasztott állapotban lévő és 200 ml-es műanyag zacskókban elhelyezett emberi vérplazmát alkalmazunk. A mélyhűtött zacskókat 45 percig tartjuk szobahőmérsékleten, és ilyen módon előmelegítjük. Ezután az egyes zacskók tartalmát mechanikai úton finomra aprítjuk. A zacskókat ezután mikrohullámú kemencébe (Husquama Modell 105, sugárzási frekvencia 2450 MHz) helyezzük, úgy, hogy egy-egy fenti típusú kemencébe 4 darab 200 ml térfogatú zacskót teszünk. A felolvasztást összesen 4,5 percig végezzük (7x15 másodperces ciklus, közben 30 —30 másodperces szünetek). Ekkor a zacskók tartalma úgy 3
