180882. lajstromszámú szabadalom • Eljárás IX. faktort valamint II. és X. faktort tartalmazó preparátum előállítására plazmából
3 180882 4 tort tartalmazó sűrítmények előállítására használják fel. Fekete és Shanbrom a 3 560 475 és a 3 682 881 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásban a protrombin-komplexet polietilén-glikollal állítják elő. Használnak ezenfelül alumíniumhidroxidot és más hasonló gélszerű anyagokat a protrombin-komplex faktorainak koncentrálására (például Bitwell, 2 867 567 sz. egyesült államokbeli szabadalmi leírás). A találmány szerinti eljárás során az összes eddig ismert módszertől eltérően a IX faktort oly módon különítjük el a plazmából, hogy az tartalmazza a II és X faktorokat, nem tartalmazza azonban a VII faktort, amely általában jelen van a protrombin-komplex eddig ismert módszerek szerint előállított sűrítményeiben. Ezenfelül a találmány szerinti eljárással előállított preparátum előnyösen különíthető el a plazmából a VIII faktor elkülönítése előtt. A találmány szerinti eljárás értelmében a II, IX és X faktorokat a folyékony halmazállapotú plazmából vízben nem oldódó, keresztkötéseket tartalmazó polielektrolit jellegű kopolimer segítségével különítjük el; a kopolimer etilén és maleinsav-anhidridből áll, és oldalláncként di-(rövidszénláncú)-alkilamino-(rövidszénláncú)-alkil-funkcionális csoportokat tartalmaz. Ha ezt a polielektrolit kopolimert viszonylag kis koncentrációban, a plazma térfogatára számítva 0,025% és 0,1% közötti mennyiségben 7,5 és 8,5 pH-n használjuk, a II, IX és X faktorokat tartalmazó úgynevezett IX faktor készítmény meglepő módon szelektíven adszorbeálódik a polielektrolit kopolimeren, míg a VII és VIII faktorok nem kötődnek, és a folyékony halmazállapotú plazmában maradnak. Ezután, adott esetben, az adszorbeálódott IX faktort (készítményt) eluáljuk a polielektrolitról, oly módon, hogy egy élettani szempontból elfogadható sóval, például nátriumkloriddal készült vizes oldattal, például 1—3 mólos nátriumklorid oldattal eluáljuk. Az eluálást előnyösen 5,5 és 6,5 közötti pH-n végezzük, végezhető azonban magasabb pH-értékeken is. A találmány szerinti frakcionálási eljáráskor használt kiindulási plazma általában frissen fagyasztott készítmény. A plazmát a polielektrolit kopolimerrel kivitelezett frakcionálás előtt fel kell olvasztanunk, az olvasztást előnyösen 35 C* hőmérsékleten végezzük. Ezután hozzáadjuk a plazmához a megfelelő polielektrolit kopolimert, az adagolt mennyiség 0,025% és 0,1% között változik, előnyösen 0,035% és 0,05% közötti mennyiséget használunk; a plazma pH-ját 7,5 és 8,5 közé állítjuk be. Ezután megfelelő ideig, például legalább 10 percen át keverjük a készítményt, ez alatt az idő alatt a IX faktort tartalmazó készítmény szelektíven adszorbeálódik a polielektrolit kopolimeren, és a hátramaradó folyékony halmazállapotú plazma nem tartalmazza a II, IX és X faktorokat. A találmány szerinti eljárás során használt vízben oldhatatlan, keresztkötéseket tartalmazó ismert polielektrolit kopolimerek az etilén és a maleinsav-anhidrid kopolimeijei, amelyek oldalláncként di-(rövidszénláncú)-alkilamino(rővidszénláncú)-alkil-funkcionális csoportokat tartalmaznak. Rövidszénláncú alkilcsoport alatt 1—4 szénatomos csoportokat értünk. Az etilén és a maleinsav-anhidrid (EMA) alap-kopolimerjét például oly módon állítjuk elő, hogy az etilént és a maleinsav-anhidridet peroxid katalizátor jelenlétében egy előnyös oldószerben reagáltatjuk. A kopolimer előnyösen gyakorlatilag ekvimoláris mennyiségű etilén-gyököt és anhidridgyököt tartalmaz. Az alap etilén-maleinsav-anhidrid kopolimert ezután egy olyan rövidszénláncú alkil-imino-bisz-(rövidszénláncú)-alkil-aminnal reagáltatjuk, amely két primer aminocsoportot tartalmaz, és amely keresztkötéseket hoz létre az etilén-maleinsav-anhidrid kopolimerben. A kívánt di-(rövidszénláncú)alkilamino-(rövidszénláncú)-alkil-funkcionális csoportokat ezután oly módon építjük be a keresztkötéseket tartalmazó kopolimerbe, hogy reagáltatjuk a di-(rövidszénláncú)-alkilamino-(rövidszénláncú)-alkilamint az etilén-maleinsavanhidrid alap polimer hátramaradó anhidridcsoportjainak egy részével. A jobb kezelhetőség érdekében a polielektrolit kopolimert előnyösen hidrogénklorid sójává alakítjuk. Ezen polielektrolit kopolimerek előállítását részletesen ismertetik a 3 554 985 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásban. Ezen polielektrolit típusú kopolimereknek a vér frakcionálására való felhasználását a 3 555 001 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírás ismerteti. Di-(rövidszénláncú)-alkilamino-(rövidszénláncú)-alkilfunkcionális csoportként előnyösen dimetil-amíno-propilcsoportot használunk, előnyös keresztkötéseket kialakító vegyületként pedig metif-imino-bisz-propilamint. A találmány szerinti eljárásban előnyösen olyan polielektrolit kopolimert használunk, amely 5 metil-imino-biszpropilamin keresztkötéseket kialakító csoportot és körülbelül 90 dimetil-amino-propilamin-funkcionális csoportot tartalmaz 100 maleinsav-anhidrid egységre számítva. Keresztkötéseket kialakító vegyületként használhatunk a fentin kívül például divinil-benzolt és etilén-diamint is, más funkcionális-csoportként használhatjuk a dimetil-aminoetil- és a dietil-aminobutil-csoportot; a fentiekkel készített polielektrolit kopolimereket szintén felhasználhatjuk a IX faktort tartalmazó készítmény elkülönítésére. Az úgynevezett IX faktor készítmény adszorpcióját követően a plazmában visszamaradó VIII faktort töményíthetjük, és ismert módszerekkel elkülöníthetjük. Az adszorbeálódott IX faktor készítményt ismert módszerekkel eluáljuk a polielektrolit kopolimerről, például 1—3 mólos vizes nátriumklorid oldattal való mosással. A találmány szerinti eljárás egy előnyös kivitelezési változata szerint a IX faktort tartalmazó készítmény pH 8-on való szelektív adszorpciójára 0,035% olyan polielektrolit kopolimert használunk, amely az etilén-maleinsav-anhidrid alap kopolimer 100 maleinsav-anhidrid egységére számítva 5 metil-imino-bisz-propilamin keresztkötést kialakító csoportot és közelítőleg 90 dimetil-amino-propilamin funkcionális csoportot tartalmaz. Az adszorbeálódott IX faktor készítményt oly módon eluáljuk a polielektrolit kopolimerről, hogy azt pH 6-on 1,7 mólos nátriumklorid oldattal mossuk. Az eluátumot 4 C° hőmérsékleten 0,1 mólos nátriumklorid oldattal szemben dializáljuk, majd fagyasztva szárítjuk és tároljuk. A találmány szerinti eljárást a továbbiakban példákkal részletesen szemléltetjük. A találmány oltalmi körét a példák természetesen nem szűkítik. 1. példa Olyan polielektrolit kopolimert állítunk elő, amely gyakorlatilag ekvimoláris mennyiségű etilént és maleinsavanhidridet tartalmaz, a keresztkötéseket metil-imino-bisz-propilaminnal alakítjuk ki, majd a terméket dimetil-amino-propilaminnal oly módon reagáltatjuk, hogy az etilén-maleinsav-anhidrid alap kopolimerben lévő 100 maleinsav-anhidrid egységre számítva 5 metil-imino-bisz-propilamin keresztkötéseket kialakító csoport és 90 dimetil-aminopropilamin oldallánc essen. A terméket hidrogénklorid sóvá alakítjuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
