180882. lajstromszámú szabadalom • Eljárás IX. faktort valamint II. és X. faktort tartalmazó preparátum előállítására plazmából
5 180882 6 1 liter közönséges emberi plazma pH-ját 1 mólos nátriumhidroxid oldattal 8-ra állítjuk be, majd 0,35 g a fentiek szerint előállított polielektrolit kopolimert adunk hozzá, és 20 percen át keverjük a szuszpenziót. Ezután szűrjük a szuszpenziót, amikor szűrletként IX faktort nem tartalmazó plazmát kapunk. A szűrési maradékot a gyantába beépült protein eltávolítására desztillált vízzel mossuk. Ezután a II, IX és X faktorokat tartalmazó úgynevezett IX faktor készítményt oly módon eluáljuk a polielektrolit kopolimerről, hogy 20 percen át 6,0 pH-n (a pH-t 0,1 mólos citromsavval állítjuk be) 25 ml 1,7 mólos nátriumklorid oldattal mossuk. Ezután szűrjük a kopolimert tartalmazó szuszpenziót, amiután szűrletként megkapjuk az előállítani szándékozott IX faktor készítményt. 7, egyenként 1 literrel készült párhuzamos frakcionálási kísérlet során átlagosan 483 ±48 egység IX faktor/liter készítményt kapunk, a tisztítási mutatószám 178 ±33. 1 egység IX faktor alatt értjük azt az anyagmennyiséget, amely 1 ml közönséges teljes plazmában található. A tisztítási mutatószámot úgy számítjuk, hogy a kiindulási plazmában lévő teljes protein mennyiségének és a végső IX faktor készítményben lévő teljes protein mennyiségének arányát szorozzuk a végső IX faktor készítményben jelenlévő IX faktor egységeinek és a kiindulási plazmában lévő IX faktor egységeinek arányával. 2. példa Az 1. példában megadott módon IX faktor készítményt állítunk elő oly módon, hogy közönséges emberi plazma millilitemyi mennyiségéhez 0,4 mg az 1. példában megadott polielektrolit kopolimert adagolunk, majd 7,4 pH-n 20 percen át keverjük a szuszpenziót, A II, VII, VIII, IX és X faktorok adszorpciója az alábbiak szerint valósul meg: Faktor Adszorbeálódott mennyiség (%„r 11 83 VII 0 VIII 5 IX 96 X 83 a kiindulási plazmára számítva A kiindulási plazmában jelenlévő faktorok mennyiségét tekintve a fenti eredmények azt mutatják, hogy a II, IX és X faktorok szelektíven adszorbeálódtak, míg a VII és VIII faktorok gyakorlatilag változatlan mennyiségben a plazmában maradtak. A koagulációs faktorok meghatározására ismert egylépéses mérését használtunk. A VIII faktor mérésére alkalmas összeállítást a Dade Division of American Hospital Supply Corporation árusítja. A mérési módszer az aktivált részleges tromboplasztin idő (PTT) mérésén alapszik, amit a vérrögök képződéséhez szükséges faktorok hiányának megállapítására használnak. A fenti mérési módszert Brinkhous és munkatársai ismertették [J. Láb. Clin. Med., 41, 637 (1953)]. A különböző koagulációs faktorok ezen mérési módszere során az ismeretlen mintát egy tromboplasztin reagenssel és olyan megfelelő faktor-hiányos szubsztrát plazmával reagáltatjuk, amely nem tartalmazza a meghatározandó faktort. Mérjük a vérrögképződés idejét. A tromboplasztin reagens nyers cefalint tartalmaz, amit patkány agyvelőből állítunk elő, és amely gyorsabban hozza létre a vérrögöket, mint a hemofiliás plazma. Ezek a reagensek jól ismertek, és például a 3 395 210,3 486 981 és 3 522 148 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásban ismertetik. A szakember számára különböző más, a találmány lényegéhez tartozó példák képzelhetők el. Mindezek érthető módon a találmány oltalmi körén belül esnek. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás a IX faktort, valamint II és X faktort tartalmazó preparátum előállítására plazmából, azzal jellemezve, hogy a folyékony halmazállapotú vérplazmához 7,5 és 8,5 közötti pH-n 0,025% és 0,1% közötti mennyiségű vízben oldhatatlan, 'di-(rövidszénláncú)-alkil-amino-(rövidszénláncú)-alkilfunkciós csoportokat tartalmazó, térhálósított etilén-maleinsavanhidrid kopolimer polielektrolitot adunk, majd a polielektrolit kopolimerhez szelektíven adszorbeálódott II, IX és X faktorokat eluáljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy dimetil-amino-propil-funkciós csoportot tartalmazó kopolimert használunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy metil-imino-bisz-propil-aminnal térhálósított etilén-maleinsavanhidrid kopolimert használunk. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan polielektrolit kopolimert használunk, mely 100 maleinsavanhidrid csoportra számítva 5 metil-imino-bisz-propilamin keresztkötéseket kialakító csoportot és 90 dimetil-amino-propil-oldallánc-csoportot tartalmaz. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a IX faktort valamint II és X faktort 1—3 mólos, vizes nátrium-klorid-oldattal eluáljuk a polielektrolit kopolimerről. 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a polielektrolit kopolimert 0,035% és 0,05% közötti mennyiségben adjuk a plazmához, és a használt polielektrolit 100 maleinsav-anhidrid csoportra számítva 5 keresztkötéseket kialakító metil-imino-bisz-propil-amino-csoportot és 90 oldalláncot képző dimetil-amino-propil-csoportot tartalmaz. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 84.5126.66-4 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: Ben kő István igazgató
