180865. lajstromszámú szabadalom • Eljárás helyettesített N-metilén-3-(2-aminoetiltio)-6-(1-hidroxietil)-7-oxo-azabiciklo[3.2 0]hept-2-én-2-karbonsav antibiotikumok és az ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
19 180865 20 A kapott szilárd anyagot alaposan átmossuk éterrel és szűrjük, amikor 0-2,4,5-triklórfenil-izokarbamid.hidrokloridot kapunk, 205—206°C-on olvadó fehér szilárd anyag formájában. 8. példa N-Dimetilaminometilén-tienamicin előállítása (T reakcióvázlat) 16,5 mg tienamicint szokásos módon 200 pl hexametildiszilazánnal és 60 pl trimetilklórszilánnal szililezünk. A szililezett tienamicint elszuszpendáljuk 1 ml etanolmentes kloroformban, nitrogénatmoszférában mágneses keverés közben. Az elegyet lehűtjük —45°C-ra és 21 pl trietilamin 21 pl kloroformban készült oldatát adjuk hozzá, amit 11,5 mg klórmetilén-dimetilammóniumklorid 50 pl kloroformmal készült oldatának hozzáadása követ. Az elegyet felemelegítjük körülbelül l óra alatt — 25°C-ra és 5 ml 0,1 n, 7 pH-értékű foszfátpuffert adunk hozzá. Az elegyet 15 percen át erőteljesen keverjük. A vizes fázist elválasztjuk és a belőle vett mintát, amely N-dimetilaminometilén-tienamicint tartalmaz, elektroforézises vizsgálatnak vetjük alá (50 V/cm, 1 óra, pH 7 puffer), amikor az elektroforézises mozgékonyságot 3,6 cm-nek találjuk a katód irányában. 9. példa N-Trifluoracetimidoil-tienamicin előállítása (11/8 képletü vegyület) 199 mg tienamicint feloldunk 7 ml 7 pH-értékű, 0,1 n foszfátpufferben, és a pH-értéket 1 n nátriumhidroxid-oldattal 8,5-re állítjuk be. A pH-értéket automata bürettával konstans értéken tartva 1 adagban hozzáadjuk az elegyhez 355 pl trifluormetilacetimid-metilészter 2,5 ml dioxánnal készült oldatát. 30 perc múlva a pH-értéket 1 n sósavoldattal 7,0-ra állítjuk be. Az oldatot ezután Dowex 50—X4 gyantán kromatografáljuk (200 ml, Na+ ciklus, 200—400 mesh) és vízzel eluáljuk. Az N-trifluoracetimidoil-tienamicin-származék az oszlop térfogatának első felében eluálódik. Ezt az eluátumot az előzőhöz hasonló módon 100 ml térfogatú Dowex 50—X4 oszlopon kromatografáljuk, és az első, az oszloptérfogatnak megfelelő mennyiséget koncentráljuk, és 30 ml XAD—2 gyantán kromatografáljuk. Az N-trifluoracetimidoil-tienamicin-származék 2,5—5,0 oszloptérfogatnál eluálódik, és liofilizálás után 15 mg fehér szilárd anyagot ad. Ultraibolya-spektrum (pH 7, 0,1 n foszfátpuffer) k 302 nm (s 4,450). Infravörös-spektrum (Nujol): 1750 cm'1 (ß4aktdm). Elektroforézis (50 V/cm, 20 perc, pH 7, 0,1 n foszfátpuffer): 2,0 cm a katód irányában. 10. példa N-Acetimidoil-tienamicin előállítása (11,9 képletü vegyület) 190 mg tienamicint feloldunk 13 ml 7 pH-értékű, 0,1 n foszfátpufferben és az oldatot mágneses keverés közben jégfürdőn lehűtjük. Az oldat pH-értékét 2,5 n nátriumhidroxidoldat automata bürettából végzett becsepegtetésével 8,5-re állítjuk be. A pH-értéket 8,5-en tartva néhány perc alatt 400 mg acetimid-etilészter-hidrokloridot adunk az elegyhez. További 40 perc múlva 2,5 n sósavoldattal 7,0-ra állítjuk be az oldat pH-értékét. Az oldatot ezután Dowex 50—X8 gyantán kromatografáljuk (250 ml Naf ciklus, 100—200 mesh) és vízzel eluáljuk. Az N-acetimidoil-származék 1 —2 oszloptérfogatnál (240—520 ml) eluálódik, és liofilizálás után 88 mg fehér szilárd anyagot ad. Ultraibolya-spektrum (pH 7, 0,1 n foszfátpuffer) X : 297 nm (e 7,620). IR-spcktrum (Nujol): 1774cm-1 (ß-laktäm). NMR-spektrum (D20) 5:1,27 (d, J = 6Hz, CH3—CH), 2,24 (S, —C CHj), 3,2—3,5 (m. CH,). 3,5—3,9 (m, II NH-CH2-),4,2-4,6(m,C5H,C6H,CH). 11. példa N-[(4-Piridil)(imino)-metil]-tienamicin előállítása (11/10 képletü vegyület) 80 mg (0,294 mmól) tienamicint feloldunk 24,7 mg (0,294 mmól) nátríumhidrogénkarbonát 2,0 ml vízzel készült, 25°C-os oldatában. Ezután 80 mg (0,588 mmól) izonikotinimid-metilésztert oldunk fel az oldatban és a reakció előrehaladását úgy követjük, hogy adott időközönként alikvot mintákat veszünk az elegyből, melyeket nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálatnak (HPLC) vetünk alá: Waters-berendezés, 0,2x61 cm, Cl8 Bondapak reverz-fázisú oszlop, l,5ml/perc, 10%-os vizes tetrahidrofurán-oldat. Ultraibolya-csúcs 254 nm-nél. A reakció lényegében 40 perc alatt teljessé válik, miután a reakcióelegyet közvetlenül 18,4 x 270 mm-es XAD gyantaoszlopon kromatografáljuk, az eluálást először deionizált, desztillált vízzel, majd 10%-os vizes tetrahidrofurán-oldattal végezve. Megvizsgáljuk az eluátum ultraibolya-spektrumát és nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálatnak vetjük alá, majd a kapott eredmények alapján elkülönítjük a tiszta terméket. A megfelelő frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk, amikor 80 mg színtelen terméket kapunk por formájában. Kitermelés: 73% Ultraibolya-spektrum: Á”jJ = 298 nm (s 7,800). Infravörös-spektrum (Nujol): 1762 cm'1 (ß-laktäm). NMR-spektrum (60 MHz, D20): 5 1,27, 3H [d, J = 7 Hz, C773.CH(OH)]: 5 7,75 és 8,80, 4 H (m, m, 4-piridil) HPLC: 1,58 x tienamicin visszatartás, a körülmények a fentiek. 12. példa A 13. példa szerinti eljárást követve, de az ottani reagens helyett pikolinimid-metilésztert használva N-[(2-piridil)-(imino)-metil]-tienamicint állítunk elő. Mennyiség: 85 mg (77%). Ultraibolya-spektrum: 2.^ = 267,300 nm (s 8,150, 7,600). Infravörös-spektrum (Nujol): 1764cm-1 (ß-laktäm). NMR-spektrum (60 MHz, D20): 5 1,24, 3H [d, J = 7 Hz, 67/,.CH(OH)], S 7,80, 8,07, 8,80, 4H (m, m, m, 2-piridil); HPLC: 1,8 x tienamicin visszatartás. 13. példa A 13. példa szerinti eljárást követve, de az ottani reagens helyett nikotinimid-metilésztert használva N-[(3-piridil) (imíno)-metil]-tienamicint állítunk elő. Mennyiség: 77 mg (70%). 5 10 15 20 25 30 35 4C 45 50 55 60 65 10
