180865. lajstromszámú szabadalom • Eljárás helyettesített N-metilén-3-(2-aminoetiltio)-6-(1-hidroxietil)-7-oxo-azabiciklo[3.2 0]hept-2-én-2-karbonsav antibiotikumok és az ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
25 180855 26-dioxánnal készült oldatát adjuk a reakcióelegyhez, miközben a pH-értéket 8,5-en tartjuk. 20 perc múlva az oldat pH-értékét 7,0-ra állítjuk be 2,5 n sósavoldat segítségével, és az oldatot Dowex 50—X4 gyantából készült oszlopon kromatografáljuk (53 ml, Na+ ciklus, 200—400 mesh), az eluáláshoz ionmentesített vizet használva. A kromatografálást egy hűtőköpennyel felszerelt oszlopon 3 °C-os hőmérsékleten végezzük. A cím szerinti vegyület 2 oszloptérfogatnál eluálódik és liofilizálás után 5 mg fehér szilárd anyag formájában marad vissza. Ultraibolya-spektrum (pH 7, 0,1 n foszfátpuffer) /.max: 295 nm (s 3,980). IR-spektrum (Nujol): 1765 cm-1 (p-laktám), NMR-spektrum (D20): 5 1,29 (d, J = 6 Hz, CH3—CH), 4,44 (s, —CH2—Ar), 7,37 (s, aril), 8,14 (s, NCH). 28. példa N'-Izopropil-N-formimidoil-tienamicin előállítása (1/19 képletű vegyület) 110 mg tienamicint feloldunk 7 ml 7 pH-értékű 0,1 n foszfátpufferben, és az oldat pH-értékét automatabürettából beengedett 1 n nátriumhidroxid-oldat segítségével 8,5-re állítjuk be. A mágnesesen kevert, pufferolt oldathoz hozzáadjuk 300 mg N-izopropilformimidát-hidroklorid 1 ml p-dioxánnal készült oldatát, miközben a pH-t 8,5-en tartjuk. 25 perc múlva az oldat pH-értékét 2,5 n nátriumhidroxid-oldattal 7,0-ra állítjuk be, és az elegyet Dowex 50—X4 gyantából készült oszlopon kromatografáljuk (53 ml, Na+ ciklus, 200—400 mesh), az eluálást ionmentesített vízzel végezve. A kromatografálást vizes hűtőköpennyel ellátott oszlopon hajtjuk végre, 3 °C hőmérsékleten. A cím szerinti vegyület 2 oszloptérfogatnál eluálódik, és liofilizálás után 12 mg fehér szilárd anyag formájában marad vissza. Ultraibolya-spektrum (pH 7, 0,1 n foszfátpuffer) >.max: 299 nm (e 8,130). IR-spektrum (Nujol): 1760cm-1 (ß-laktäm), NMR-spektrum (D20): S 1,26 [d, J = Hz, CH3CH(OH)], 1,29 [d, J = 6 Hz, CH(CH3)3], 7,89 (s, NHCH), 7,96 (s, NHCH). 29. példa N-(N'-Allil-formimidoil)-tienamicin előállítása (1/20 képletű vegyület) 123 mg (0,452 mmól) előre lehűtött tienamicinhez hozzáadunk 13 ml hideg 0,1 n foszfátpuffert. Az oldat pH-értékét 1 n nátriumhidroxid-oldattal 9-re állítjuk be. Ehhez a lúgos oldathoz 2 °C-on 1 adagban hozzáadunk 0,3 g etil-N-allil-formimidát-hidrokloridot. Eközben a pH-érték 2,3-re csökken, melyet további mennyiségű nátriumhidroxiddal ismét visszaállítunk 8,5-re. A reakcióelegyet 2°C-on további 30 percen át keverjük és a pH-értéket hideg 0,1 n kénsavval 7-re állítjuk be. A reakcióelegyet nagynyomású folyadék-kromatográfiás vizsgálatnak vetjük alá C18-Porosil oszlopon, az előhívást 10%-os vizes tetrahidrofuránnal végezve, amikor azt találjuk, hogy csak nyomnyi mennyiségű tienamicin van jelen (visszatartási idő 5 perc), és lényegében tiszta terméket kapunk (visszatartási idő 10,5 perc). A reakcióelegyet Dowex 50—X4 oszlopon (60 ml, Na+ ciklus, 200—400 mesh) kromatografáljuk, az eluálást vízzel végezve. Áramlási sebesség 0,5 ml a gyantaágy 1 cm2-ére számítva. Az első 400 ml eluátum elöntése után a következő 150 ml-t liofilizáljuk, amikor a cím szerinti terméket kapjuk. Kitermelés: 96 mg (63%). Ultraibolya-spektrum: X max 301 nm, 24,6 optikai intenzitás egység, 90%-os tisztaság. IR-spektrum (Nujol): C=0 kötést mutat 5,67 és 5,90 p-nál. NMR-spektrum (100 MHz, D20): Az eredmények azt mutatják, hogy szín- és anti-N-(N'-allil-formimidoil)-tienamicin van jelen. 30. példa N-(N'-Trifluoretil-formimidoil)-tienamicin előállítása (1/21 képletű vegyület) 123 mg (0,452 mmól) előre hűtött tienamicinhez hozzáadunk 15 ml hideg 0,1 n foszfátpuffert. Az oldat pH-értékét 1 n nátriumhidroxid-oldattal 9-re állítjuk be. Az így kapott lúgos oldathoz 0—2 °C hőmérsékleten hozzáadunk 0,3 ml, 2 ml dioxánban feloldott etil-N-trifluoretil-formimidátot, 30 perc alatt, több részletben. Az adagolás alatt ügyelünk arra, hogy a reakcióelegy pH-értéke 8,5—9 között maradjon. A reakcióelegyet néhány percen át keverjük. Ezután befejezzük az imidát adagolását, és a pH-értéket hideg 0,1 n kénsav. HPLC oldattal 7-re állítjuk be. C18-Porosil (revert fázis) oszlopon végzett nagynyomású folyadékkromatográfiás mérés során 12,2 perces visszatartási időnek megfelelő új csúcsot kapunk, ami a kívánt terméket jelzi. Az elegyet Dowex 50—X4 oszlopon kromatografáljuk (60 ml, 200—400 mesh). Az oszlopot vízzel eluáljuk 0,5 ml/perc/cm2 áramlási sebesség mellett. Az első frakciót elöntjük, majd a kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk, amikor a cím szerinti vegyületet 10,2 mg higroszkópos szilárd anyag formájában kapjuk. >.mak 302 nm. 31. példa N-(N'-Karboximetil-formimidoil)-tienamicin nátriumsójának előállítása (1/22 képletű vegyület) 130 mg tienamicint feloldunk 4 ml 7 pH-értékű 0,1 n foszfátpufferben és az oldathoz egy adagban hozzáadunk 500 mg etil-N-karboximetil-formimidát-nátriumsót. Az oldat pH-értékét automatabürettából beengedett 1 n nátriumhidroxid-oldattal 8,5-re állítjuk be. 25 perc múlva az oldat pH-értékét 2,5 n sósav-oldattal 7,0-ra állítjuk be. Az oldatot ezután jeges vizes hűtőköpennyel ellátott Dowex 50—X4 oszlopon kromatografáljuk (51 ml, Na+ ciklus, 200—400 mesh), az eluálást ionmentesített vízzel végezve. Az első oszloptérfogatnak megfelelő eluátumokat összegyűjtjük és 7 ml térfogatra koncentráljuk. A kapott oldatot ezután jeges vizes hütőköpennyel felszerelt X AD-2 gyantából készült oszlopon kromatografáljuk (53 ml), az eluálást ionmentesített vízzel végezve. A másodiktól negyedik oszloptérfogatnak megfelelő frakciókat összegyűjtjük és liofilizáljuk, amikor 25 mg cím szerinti vegyületet kapunk. Ultraibolya-spektrum (pH 7, 0,1 n foszfátpuffer) V“: 300 nm, (e 6,390). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 13
