180746. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-21978 jelű antibiotikum előállítására
7 180746 8 Az À—21978C komponenseket nagyfel&bntású folyadékkromafográfiával áz alábbi' körülmények között elkülöníthetjük: oszlop : üveg, 1x21 cm ‘ töltet: szilikagél, C18 (Quantum LP—1); oldószer: 0,'2% ecetsav és 0,2% pirídint tartalmazó alábbi összetételű elegy: víz : metanol : acetonitril = =95:30:75; detektor: UV, 285 nm; nyomás: 8,5 atm. Az A—21978Ç komponensek nátrium-sóinak retenciós idejét a 8. táblázatban adjuk meg. ' " 8'. táblázat *" -Nagyfelbontású folyadék-kromatográfiás retenciós idők A—21978C komponens Idő, (perc) >í -J> (Micrococcus , Biológiai mérés luteus) • • . egység, (mg) c0 6 • i 966 C, . 8 1663 C4 9 1410 c2 13 1390 C5 .14 . 1246 C3 19 803 Az A—21978C keverék elválasztható és az A—21978 A, B, D és E komponensektől szilikagél vékonyrétegkromatográfiával megkülönböztethető. Oldószér-elegyként acetonitriles víz 3 : 1 arányú elegyét használjuk, a biológiailag aktív foltokat biológiai méréssel, Micrococfcús luteus mikroorganizmussal detektáljuk. A 9. táblázatban megadjuk az A—21978 komponensek nátriumsóinak Rf-értékeit. 9. táblázat A—21978 komponens Rf-érték A 0,66 B 0,57 C keverék 0,31 D 0,51. .. ... E 0,48 Az A—21978C keverék összetevőit elkülöníthetjük és egymástól megkülönböztethetjük reverz fázisú szilikagél (Quantum C18) kromatográfiával. Oldószer elegyként víz, metanol és acetonitril 45 : 15 : 40 arányú elegyét használjuk, amely 0,2% piridint és 0,2% ecetsavat tartalmaz. A detektálást hosszú hullámú UV-fénnyel (365 nm) végezzük. Az A—21978C kómpónensek nátrium-sóinak Rf-értékeit a fenti rendszerben a 10. táblázatban adjuk meg. 10! táblázat A—21978C komponens Rf-érték 0,71 Cr ” - • * , 0,64 CV ' 0,56 4 c3 0,47 C4 0,63 C5' 0,53 Az A—2Í'978C komponensek és az A—21978 keverék pH = 2 és pH=§ közötti oldatokban Y Ç° és'25‘C“ közötti hőmérsékleten légalább hét napon át stabil. pH= 11-en instabil (4 óra múlva teljesen inaktiválódik), mind 5 Cc-on, mind 25 C°-on. Az A—21978, az A -21978C keverék és az A—2I978C komponensek, nevezetesen a C0, Ct, C2; C3j C4 és Cs sókat képeznek. A sókat a keverékek elkülönítésére és tisztítására és az egyes komponensek elkülönítésére használjuk. Ezenfelül különösen előnyös tulajdonságokkal rendelkeznek a gyógyszerészeti szempontból elfogadható sók. A „gyógyszerészeti szempontból elfogadható” sók azok a sók, amelyek toxicitása a melegvérű állatokkal szemben nem nagyobb mint a nem só alaké. Az A—21978 antibiotikumoknak^ öt szabad, sóképzésre alkalmas karboxilcsöpörtja van. így a találmány oltalmi köréhez részleges, kevert és teljes sók is tartoznak. A sók előállítására olyan körülményeket választunk, ahol a reakcióelegy pH-ja nem nagyobb mint 10, mivel ezen a pH-értéken az antibiotikumok bomlanak. Az A—21978 antibiotikumoknak két szabad aminocsoportja van, ily módon mono- vagy di-savaddíciós sókat képeznek. Különösen előnyös tulajdonságúak a gyógyszerészeti szempontból elfogadható alkálifém-, alkáli-földfém- és amin-sók, és továbbá a savaddíciós sók. Az A—21978 antibiotikumok előnyös alkálifém- és alkáli-földfém-sói közül megemlítjük a nátrium-, kálium-, lítium-, cézium-, rubidium-, bárium-, kalcium- és magnézium-sókat. Az A—21978 antibiotikumok előnyös amin-sói például az ammónium-sók, a primer, szekunder és tercier 1— 4 szénatomos alkil-ammónium- és hidroxi-(2—4 szénatomos)-ammóniumsók. Az amin-sók közé tartoznak azok, amelyek egy A—21978 antibiotikumnak az ammónium-hidroxiddal, metil-aminnal, szekunder-butil-aminnal, izopropil-aminnal, dietil-aminnal, di-izo-propil-aminnal, etanol-aminnal, trietil-aminnal, 3-ámino-l-propanollal és hasonlókkal való reakciókor keletkeznek. Az A—21978 antibiotikumok alkálifém- és alkáli-földfém-kationos sóit a kationos sók általános előállítási szabályaik szerint kapjuk meg. Például úgy járunk el, hogy az A—21978C Cj komponens szabad savas alakját előnyös oldószerben, például meleg metanolban vagy vízben oldjuk ; az oldathoz olyan vizes metanolt adunk, amely sztöchiometrikus mennyiségű kiválasztott szervetlen bázist tartalmaz. A képződő sót ismert módszerekkel, például szűréssel vagy az oldószer desztillációval való eltávolításával különítjük el. ffasonló módon állítjuk elő a szerves aminokkal képzett sókat. Például úgy járunk el, hogy az A—2I978C C] komponenst megfelelő oldószerben, például acetonban oldjuk, majd az oldathoz gáz alakú vagy vizes amint adunk. Az oldószert és a fölös mennyiségű amint desztillációval eltávolítjuk. Az A—21978 antibiotikumok előnyös savaddíciós sói azok a sók, amelyek szerves vagy szervetlen savakkal, például hidrogén-kloriddal, kénsavval, foszforsavval, ecetsavval, borostyánkősavval, citromsavval, tejsavval, almasavval, fumársavval, palmitinsavval, kolsjivval, pamoénsavval, D-glutaminsavval, d-kámforsavval, glutársavval, ftálsavval, borkősavval, laurinsavval, sztearinsavval, szalicilsavval, metán-szulfonsavval, benzol-szulfonsavval, pikrinsavval, benzoesawal, fahéjsavval és más hasonló savakkal képződtek. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65-'4
