180723. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fáldalomcsillapító hatású pentapeptid-származékok előállítására
31 180723 32 hideg, 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldaira öntjük. Dietil-éterrel kirázzuk a vizes szuszpenziót, vízzel, hideg, 0,75 nórmál citrömsav-oldattal, majd megint vízzel mossuk a dietil-éteres oldatot, vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és csökkentetr nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Dietil-éter és petroléter elegyéből kristályosítjuk a desztillációs maradékként nyert szirupszerű anyagot, ily módon 16 g-nyi (48%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 75—77 C°, [a]25 = —117,3' (c = 0,5, kloroform). Analízis a CnF^NjOjS képlet alapján (262,37): számított: C 50,36%; H 8,45%; N 10,68%; talált: C 50,63%; H 8,57%; N 10,45%. C) N^-Tercier-butoxi-karbohil-L-fenil-alanil-N*-metil-L-metionil-amid 70 ml jégecet, 5 ml anizol, 7 ml trielil-szilán és 13,15 g (0,05 mól), a B) pontban leírt módon nyert termék elegyébe 25 percen át vízmentes sósavgázt vezetünk. Dietil-éterbe öntjük az elegyet és kiszűrjük, majd megszárítjuk a kivált csapadékot (9,9 g). 200 ml dimetil-formamidban feloldjuk ezt a sósavas sót, 0 C° hőmérsékletre hűtjük az oldatot, és hozzáadunk 9,9 ml (0,05 mól) diciklohexil-amint. 10 perces keverés után a? elegyhez hozzáadunk 6,8 g (0,05 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt, 13,3 g (0,05 mól) NMercier-butoxi-karbonil-L-fenil-alanint, majd 10,3 g (0,05 mól) N,N'-diciklohexil-karbodiimidet. 2 órán át 0 C° hőmérsékleten, majd 48 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Utána ismét 0 C" hőmérsékletre hűtjük, kiszűrjük a kivált csapadékot és a szűrletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a maradékként nyert olajat és egymás után 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, 0,75 normál citromsav-oldattal, majd végül megint vízzel mossuk az etíl-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és Jedesztilláljuk az oldószert..Dietil-éterből kristályosítjuk a maradékot, ily módon 16,4 g-nyi (80%) mennyiségben nyerjük a kívánt termeket, op.: 114—115 C“, [z]d = — 43,4° (c=0,5, metanol). Analízis a C20H31N3O4S képlet alapján (409,55): számított: C 58,65%; K 7,63%; N 10,26%; talált: C 58,76%-; H7,42%; N 10,30%. D) NU-Tercier-butoxi-karbonil-L-tirozíi-D-alanil-gliciI-L-feniI-alanil-Na-metil-L-metionil-amid 20 ml jégecet, 2 ml anizol, 2 ml trietil-szilán és 3,5 g (8,56 millimól), aCJ pontban leírt módon nyert termék elegyébe 25 percen át vízmentes sósavgázt vezetünk. Utána dietil-étert adunk az elegyhez, kiszűrjük a kivált sósavas sót és csökkentett nyomáson megszárítjuk. 5,0 g (8,47 millimól) NMercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-glicin-diciklohexil-ammónium-só 40 ml dimetil-formamiddal készült oldatát 0 C° hőmérsékletre hűtjük és hozzáadjuk a fenti módon nyert sósavas sót. Néhány percig 0 Cc hőmérsékleten kevertetjük az elegyet, majd hozzáadunk 1,1 g (8,47 millimól) 1-hidroxi-benzotriazolt és 1,7 g (8,47 millimól) N,N'-diciklohe> il-karbodiimidet. Utána 24 órán át 4 C° hőmérsékleten keverjük az elegyet. Ezután kiszűrjük a kivált csapadékot és a szűrletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a maradékot és egymás után 1 normál vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, hideg, 0,75 normál citromsav-oldattal és végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. G—62 jelzésű Grace—Davjdson-féle szilikagélen kromatografáljuk a maradékot, ily módon 4,1 g-nyi (69%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, [a]ß = — 13,1° (c=0,5, metanól). Analízis a C34H4gN6OsS képlet alapján (700,86): számított: C 58,27%; H6,9Ö%; N 11,99%; talált: C 58,05%; H6,62%; N 11,73%. Az aminosav-analízis talált értékei: tirozin: 1,00; alanin: 1,01; glicin: 0,99; fenil-alanin: 1,00, NET3: 1,01. EJ L-Tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-N’-metil-L-metionil-amid-acetát 15 ml tioanízolhoz hozzáadunk 8,3 g (0,012 mól), a D) pontban leírt módon nyert terméket. 0 Cr hőmérsékletre hűtjük az elegyet és hozzáadunk 50 ml hideg trifluor-ecetsavat. Fél órán át 0 C° hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd az elegy térfogatára számított többszörös mennyiségű dietil-éterrel hígítjuk. Kiszűrjük és megszárítjuk a kivált csapadékot, ily módon 8,0 g nyers trifluor-ecetsavas sót nyerünk. Annyi vizes puffer-oldatban (1% piridint és 0,05% ecetsavat tartalmazó víz) oldjuk ezt a sót, hogy az oldat össztérfogata 60 ml legyen. Acetát-formában levő DEAE—Sephadex A—25-tel töltött, 5 >; 138 cm méretű, a fenti puffer-oldattal előzőleg egyensúlyba hozott oszlopra visszük fel az oldatot, és az oszlop mosása során nyert frakciókat a 280 mii. hullámhossznál mért UV-fényelnyelés alapján vizsgáljuk. A kívánt termék 1270 ml mosófolyadék átfolyatása után jelenik meg az oszlopról lejövő frakciókban és mennyisége 1950 ml mosófolyadék átfolyatása után csökken elhanyagolható mértékűre. Fagyasztva szárítjuk a terméket tartalmazó frakciókat. 1 normál ecetsav-oldatban feloldjuk a maradékot és fagyasztva szárítjuk az oldatot. Víz és acetonitril 3 : 1 arányú elegyéből végzett újabb fagyasztva szárítás után 6,64 g-nyi (83%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, [a]o= 4-2!,7c (c=l, normál sósav-oldat). Analízis a C3íH44NbOgS képlet alapján (660,79): számított: C 56,35%; H 6,71%; N 12,72%; O 19,37%; talált: C 56,50%; H 6,46%: N 12,62%; O 19,25%. Az aminosav-analízis talál! értékei: tirozin: 1,00; alanin: 1,01: glicin: 1,00; fenil-alanin: 0,99; NH3: 1,03. 10. példa L-íirozil-D-alanil-glicil-L-fenilalanil-N’-metil-L-metionilamid acetátsó A) L-tirozil-D-alanil-gliciJ-L-fenilalanil-N’-metil-L-metionil-benzhidrilamin gyanta trifluorecetsavas só A peptid-gyanta vegyületet automatizált szilárd fázisú szintézissel állítottuk elő Beckman 990 peptid-szintetizátorban, 5,0 g benzhidrilamin gyantát alkalmazva. A gyantát 4%-os metilénkloridos diizopropiletilaminnal (DÍEA) semlegesítettük, majd Boc-(N-Me)-Met-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 16
