180723. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fáldalomcsillapító hatású pentapeptid-származékok előállítására
27 180723 nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk^ a maradékot, és egymás után 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, 0,75 normál citromsav-oldattal és végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Kloroformban feloldjuk a maradékot, és fçlvisszük az oldatot egy Grade 62 jelzésű Grace—Davidsoh-féjç szilikagéllel töltött, 3x45 cm méretű oszlopra. Először kloroformmal, majd 10%-ig növekvő mennyiségű jnetanolt is tartalmazó kloroformmal mossuk az oszlopot. Vékonyrétegkromatográfiával vizsgáljuk az oszlopról lejövő frakciókat, és a megfelelő frakciódról egyesítve, csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószereket. Ily módon 5,7 g-nvi (73%) termeléssel nyerjük g, kívánt terméket, [a]n=—49,5° (c-0,5, metanol), az NMR-spektrum (deutero-kloroformos oldatban felvéve) jellemző csúcsai: 8 ---1,4, tercier-butil-csöport; 8 -7,25, fenilcsoport; 8=0,95—0,75, CIKCH,)-; 8 2.7, \ díj. D) N2-Tercier-butpxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-N’-metil-L-leucil-arnid 20 ml 1 normál jégecetes sósav-oldat és 1 ml anizol elegyéhez hozzáadunk 2,0 g, a C) pontban leírt módón nyert terméket. Fél órán át szobahőmérsékleten tartjuk az"elegyet, majd'dietil-éterí adunk hozzá és behűtjük. Kiszűrjük és megszárííjuk;a kivált csapadékot (1,63 g). 30 ml dimetil-formamidban feloldjuk ezt a sóSavas sót és hozzáadunk 2,95 g (0,005 mól) NMercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-glicin-diciklohexil-ammóniumsót. 15 percig 0 C° hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd hozzáadunk 0,675 g (0,005 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt és 1,3 g (0,005 mól) N,N'-diciklohexil-karbodíimidet. Utána 24 órán át 4 Cc hőmérsékleten keverjük az elegyet. Kiszűrjük a kivált csapadékot, és a szürletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a maradékot, és egymás után 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, 0,75 normál citromsav-oldattal és végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Kloroformban feloldjuk a maradékot, és az oldatot felvisszük egy Grade III jelzésű Woelm-féle szilikagéllel töltött, 3 45 cm méretű oszlopra. Először kloroformmal, majd 10%-ig növekv ő mennyiségű metanolt is tartalmazó kloroformmal mossuk az oszlopot. A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok alapján a raegfele.lő frakciókról egyesítve, csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oícfószereket, ily módón 2(3 g-nyi (67%) méyiriyiségben nyerjük a kívánt terméket, [z]d — — 17,5’ (c=Ö,6, metanol). — Analízis "a.Ç3JHJ0NfiO8 képlet alapján (682,8): számított: C 61,57%;' H 7,38%: N 12,31%:'. talált: C 61,33%; H 7,47%?;. N 12,08%. Az aminosav-analízis talált értékel; tirozin: 1,00; alánin: i,01 : glicin: 0,99; fcnil-alanin: l’ÖO: NH(: 1,08. Ç) L-Tirozil-D-alanil-giicil-L-fenil-alanifN’-metil“-leucil-amid-aceiát 5 ml liángyasav, 0,5 ml anizol 68,0,1 ml trictil-szilán elegyéhez hozzáadunk 1,8 g (0,003 mól), a D) pontban leírt módon nyeri terméket. 3 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet, majd dietil-éterrel hígítjuk, és I órán át állni hagyjuk. Leöntjük a dietil-éteres oldatot a kivált olajos anyagról, és etanolban feloldjuk az olajat. Dietil-éter hozzáadásával csapadék válik ki, ezt ki- 5 szűrjük és megszárítjuk, ily módon 0,9 g nyersterméket nyerünk, ^cnnyi puffer-oldatban (1% piridint és 0,05% hangyasavat,tartalmazó víz) oldjuk fel a nyersterméket, hogy az oldat össztérfogata 5 ml legyen. DEAE x Sephadex A—25-tel (formiát-fázis) töltött, 2,5 x 100 cm 10 méretű oszlopra vfsszűk fel a fenti oldatot, és a fent megadott összetételű puffer-oldattal mossuk az oszlopot. A 280 nm hullámhossznál mért UV-fényelnyelés alapján egyesített' frakciókat fagyasztva szárítjuk. 10%-os ecetsavból és víz és acetonitril 75 : 25 arányú 15 elégyéből újra fagyasztva szárítva 0,852 g-nyi mennyiségben'nyerjük a kívánt terméket, [a]o= + 23,2c (c = 0,6, Ï nprrpál sósav-oldat). ’ Az aminosav-árialízis talált értékei:'tirozin: 1,02; alanin: 1,00; glicin: 1,01 : fenilalanin: 0,96; NH,: 1,03. 20 " , ' ' '' , 8. példa L-TiroziI-D-alanil-glicil-L-fenil-aÍanil-S-(p-meto\i- 25 -benziI)-L-ciszteinil-amid-hidroklpri,d ' ' . Í Á ” - . Aj N'-Tercier-butoxi-karbonii-S-(p-metoxi-benzil)-L-ciszteinil-amid 30 , ____ , 80 ml, —15 C° hőmérsékletre hűtött dimetil-formamidhoz hozzáadunk 6,82 g (0,02 mól) NMercier-butoxi-karboniI-S-(p-metoxi-benzil)-L-ciszteint. Utána 2,88 ml (0,022 mól) klór-szénsav-izobutil-észtert, majd 35 2,42 ml (0,022 mól) N-metil-morfolint adunk a hűtött elegyhez. 10 perc múlva vízmentes ammóniagázt kezdünk azelegybe vezetni, és azt másfél órán át folytatjuk. További 2 órán át —15 C° hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd jég és 1 normál nátrium-hidrogén-karbo- 40 nát-oldat elegyére öntjük. Etil-acetáttal kirázzuk az ily módon nyert vizes szuszpenziót, és egymás után vízzel, 0,75 normál citromsav-oldattal, majd megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk' és csökkentett nyomáson lé- 45 désztilláljuk az oldószert. Étanol és víz elegyébőfátkristályosítjuk a maradékot, ily módón 4,9 g-nyi (72%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 138— 140 C°, [x]d= — 12,8° (e 0.5, metanol). Analízis a Cj6H24N%04S képlet alapján (340,4): 50 számított: C 56,45%f H 7,11%: N 8,23%; talált: Ç 56,58%: H6,97%: %8,Ö7%. ,‘B) NI-Tercier-buio.\i-kárbanil -L’-feniI-alán'il-S-(p-metoxi-benziI)-L-ciszteinil-amid 1 i . “ „ ■ 55 4,1 g (0,012 mól), az A) pontban leírt módon nyert termék 45 .ml jégecet, 5 ml anizol és 5. ml trietil-szilán elegyével készült oldatába 20 percen át vízmentes sósavgázt vezetünk. Utána'dietil-étert adunk az elegyhez, ki- 60 szűrjük a kivált. csapadékot és megszárítjuk (3,3 g). 50 ml dimetil-formamidban feloldjuk ezt a sósávas sót, hozzáadunk 2,92 g (0,012 mól) diciklohex'il'-amifit, 3,19 g NMerciér-butoxi-karbonil-L-fenii-alanint, ‘ és végül 1,62 g (0,012 mól) 1-hidroxi-benzotriazoh. 10 percig 65 0 C hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd hozzá14
