180421. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3,4,5-trihidroxi-piperidin-származékok előállítására
13 180 421 14 (1 üvegcse glükóz-dehidrogenáz-mutarotáz liofilizált elegy „MERCK 14053”) és 331,7 mg béta-nikotinamid-adenin-dinukleotid (szabad sav, „BOEHRINGER”, T tisztasági fok) 250 ml 0,5 mólos, 7,6 pH-értékű t rísz -puff errel készített oldatának hozzáadása útján. A felszabadított glükóz mennyiségének meghatározása céljából az elegyet 37 °C hőmérsékleten 30 percig inkubáltatják, majd 340 nm-nél fotometrálják egy enzimet szacharóz nélkül tartalmazó reagens-vakpróbával szemben. Az inhibitorok gátló-aktivitásának kiszámítását megnehezíti az a körülmény, hogy már a vizsgálati rendszer csekély mértékű változásai, például a 100%-értéknek vizsgálatonként kissé változó nagysága is el nem hanyagolható befolyással van a vizsgálat eredményére. Ezt a nehézséget oly módon lehet kiküszöbölni, hogy minden egyes vizsgálatnál egy párhuzamos standard-vizsgálatot is végzünk; standardként egy C25H,3018N képletű szacharáz-inhibitor alkalmazható, amelynek specifikus gátlási aktivitása 77 700 SIE/g és amely 10—20 ng menynyiségekben való alkalmazás esetén a fent megadott nagyságrendű gátlási értékeket ad. A 100-értéknek 340 nm-nél mutatott extinkciója és a standard által gátolt próba-minta extinkciója közötti különbség ismeretében, a bevitt inhibitor-mennyiség figyelembevételével, a 100%-érték és a vizsgálandó oldat által gátolt próba-minta közötti extinkció-kiilönbségből ismert módon ki lehet számítani a grammonkénti szacharáz-inhibitor-egységekben (SIE/g) kifejezett specifikus gátlási aktivitást. Az in vitro szacharóz-inbihitor vizsgálat eredményei Példa száma Aktivitás (SIE/g) 2. 85 470 3. 62 160 4. 27 195 5. 62 160 6. 38 850 7. 58 275 8. 31080 9. 279 720 11. 38 850 12. 2 354 310 13. 139 860 17. 77 700 18. 132 090 19. 1 631 700 20. 139 860 21. 54 390 22. 23 310 23. 365 190 27. 466 200 28. 77 700 29. 31080 30. 1 235 430 31. 590 520 32. 489 510 33. 1 313 130 34. 893 550 35. 481 740 36. 1 149 960 Példa száma Aktivitás (SIE/g) 37. 1 344 210 38. 155 400 39. 1 390 830 40. 310 800- 466 200 41. 380 730 42. 916 860 43. 497 280 44. 714 840 45. 388 500 46. 1 600 620 48. 1 655 010 52. 310 800 53. 194 250 54. 341 880 55. 1149 960 56. 209 790 57. 1 437 450 58. 1 118 880 59. 1 460 760 60. 777 000 61. 132 090 65. 264 181 1. példa A kiindulási anyag előállítása 26-Imino-2-hidroximetil-2,6-didezoxi-L-ido-(L-gulo) -hexonsav-nitril 46,6 g 6-amino-6-dezoxi-L-szorbofuranóz-hidroklorid-monohidrát 200 ml 0,5 n sósavoldattal készített oldatához 14,7 g nátrium-cianidot adunk és az elegyet 3 óra hosszat keverjük. Ezután az elegyet vákuumban, 25 °C hőmérsékleten híg sziruppá pároljuk be, 200 ml 1:1 arányú metanol-etanol elegyet á lunk hozzá és a levált sót kiszűrjük. A szűrletet vákuumban, 25 °C hőmérsékleten bepároljuk, a maradékként kapott kristályos szilárd anyagot etan diai elkeverjük, leszívatjuk, majd a szűrőn etan dial és dietil-éterrel mossuk. Ily módon 34,5 g (az elméleti hozam 92%-a) színtelen kristályos terméket kapunk, amely bomlás közben 156 °C on olvad. Ráérték az (1) futtatószerben: 0,194 E,-érték az (2) futtatószerben: 0,119 E,-érték az (3) futtatószerben : 0,6 (1) futtatószer: kloroform, metanol és 25%-os ammónium-hidroxid-oldat 6:4:1 tf. arányú elegye (2) futtatószer: kloroform, etil-acetát, metanol és 25%-os ammónium-hidroxid-oldat 40:40:30:1 tf. arányú elegye (3) futtatószer: etil-acetát, metanol, víz és 25%-os ammónium-hidroxid-oldat 120:70 : : 10:2 arányú elegye 2. példa 2-Aminometil-2-hidroximetil-3,4,5-trihidroxi-piperidin, (X) képletű vegyidet 15 g 2,6-imino-2-hidroximetil-2,6-didezoxi-L-ido-i^L-guloj-hexonsav-nitrilt 200 ml vízben oldunk, az oldathoz Raney-nikkel katalizátort adunk és 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
