180218. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás intravénásan beadható gamma-globulin előállítására
180218 mg/ml hőkezelt humán-albumint, 0,025 mól/liter nátriumáéetátot, 0,15 mól/liter glicint és 1-2 g/100 ml, előnyösen 2 g/100 ml mannitot vizben feloldunk, és az oldat pH-értékét 5»l~re beállítjuk* Ma nnit helyett laktózt is használhatunk'. Az igy kapott oldatot, amely 5-6 % lg G-t tartalmaz, liofilizálhatjuk, vagy mint folyadékot 10° alatt tartva tárolhatjuk. Ha mint folyadékot tároljuk, akkor a feloldáshoz használt fenti oldatból a mannitot elhagyjuk; Az oldatot a következőképpen liofilizáljukj az oldat pH-értékét 1 %-os nátriumhidroxid-oldattal 6,4-6,6-ra beállítjuk, az oldat kivánt mennyiségeit kis palackokba töltjük, gyorsan lefagyasztjuk, és a liofilizálást a szokásos módon elvégezzük, gondosan ügyelve arra, nehogy a viz eltávolítása után a liofilizátumot tulhevitsük. A liofilizált termék bármikor ismét feloldható, és belőle 5-6 % r -gobulint tartalmazó oldat készíthető. Az oldat fagyasztva vagy legfeljebb 10° hőmérsékleten legalább 1 évig, a liofilizált por legalább 2 évig stabil, ' A termék legalább 97 % tisztaságú, egyetlen lehetséges szennyezése az albumin. Az antíkomplementer aktivitás kevesebb mint 0,01 egység .1 mg ^-globulinra /0,0005-0,0025 egység tartományú/. Az egységeket Mayer "Zwei Einheiten-Test" módszerével /lásd fent/ mérjük. 2. példa 1-4 %, előnyösen 2 % polietilénglikol 4000-et és 0,1-1 %, előnyösen 0,2 % humán albumint tartalmazó, pirogén anyagoktól mentes desztillált vizben 0-5°-on feloldjuk a Oohn II-frakció Gr.Am. Ohem. Soc. 68, 459-475 A946/Q pasztáját vagy porát, úgy, hogy 1-5 %, előnyösen 2 % protemtartalmu oldatot kapjunk; Az oldat pH-értekét 5,1-re /4,9-6,0, előnyösen 5*0-5,8 pH-tartomán^/ beállítjukj és a kivált csapadékot, ami 1 óra elteltével képződik, szűréssel vagy centrifugálással eltávolítjuk. A szürlet polietilénglikol-koncentrációját 50 %-os ïEG-4000-oldattal vagy száraz FEG-4000-porral 4 %-ra növeljük. Az 1 óra alatt képződött csapadékot eltávolítjuk, majd 6 % etanolkoncentrácio eléréséig etanolt adunk lassan az oldathoz úgy, hogy hőmérséklete a 2°-t ne haladja meg. A képződött csapadekot 1-12 óra, előnyösen 12 óra múlva eltávolítjuk. Az oldat pH-értékét ezután 8,0-ra /6,8-8,1 pH-tartomány/ növeljük. A kivált csapadékot az etanoltartalom 25 %-ra történő növelése után ki— centrifugáljuk. és.az első példában leírtak szerint újra feloldjuk. A termék TM-globulin-tartalma több mint 99 %f a mérést az albuminnak az ujrafeloldáshoz használt oldathoz történő hozzáadása előtt végezve. Egy 50 mg ^-g lobul int/ml oldatot /5%os/ a Mayer-féle standard teszttel ellenőrizve nem vehető észre a hemolizis gátlása, vagyis az anti komp le ment er aktivitás kisebb mint 0,01 egység/mg Ig G, A végső oldat idegen proteinként csak a hozzáadott albumint tartalmazza, amit a hepatitis B vírusok eltávolítása céljából előzétesen ismert módon hőkezeltünk. Más protein jelenléte a szokásos technikákkal, igy például cellulózacetát-elektroforézissel, immunkelektroforézissel.vagy immundiffűzióval nem mutatható ki. 3. példa Ismert módon izolált placentáris ^-globulint a 2. példa szerint feldolgozunk. Mivel a placentáris -globulin, amelyet ismert módon izoláltunk, néhány %, plazma-proteinekből álló
